[發明專利]血小板檢測用微芯片及使用該微芯片的血小板檢測裝置

有效

• 申請號: 201180008579.0
• 申請日: 2011-02-10
• 公開（公告）號: CN102762991A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 細川和也;和田朋子;深澤征司;近藤太郎;寺田真紀
• 申請（專利權）人: 藤森工業株式會社
• 主分類號: G01N37/00
• 分類號: G01N37/00;G01N33/49;G01N33/86
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290
• 代理人: 張淑珍;王維玉

技術領域

本發明涉及一種使用微量血液檢測血液中血小板功能的微芯片及使用該微芯片的檢測裝置。

背景技術

（血小板凝集檢測的現有技術存在的問題）

血小板的活化及凝集在動脈中的血栓形成（白色血栓）或初期止血中發揮著關鍵作用。

當血管受損時，血小板與血管內皮細胞下存在的膠原蛋白直接和間接地結合。在血流緩慢的環境下（低剪切應力下），它們的結合主要是經由諸如GPVI等膠原蛋白受體的直接結合；而在血流快速的環境下（高剪切應力下），vWF與膠原蛋白結合，并且血小板的GPIbα受體與vWF結合，從而導致血小板與膠原蛋白的間接結合。與膠原蛋白的直接和間接相互作用使血小板活化，并且通過這種刺激，從致密顆粒和α-顆粒釋放諸如ADP和血清素等各種血小板活化物質。

上述釋放出的血小板活化因子可使血小板自身和周圍的血小板活化。受到活化的血小板使纖維蛋白原受體GPIIb、IIIa經歷活化型的結構變化，使血小板對于纖維蛋白原變為高親和型。通過二聚體纖維蛋白原，活化的血小板彼此順次交聯，形成血小板凝集。

但是，目前測定血小板凝集的裝置多數為測定通過大量血小板活化試劑的刺激使血小板活化和凝集過程的方法（非專利文獻1）。

因此，在與生理性血小板活化條件很不相同的環境下誘發血小板活化反應，可測定各種受體的先天性功能異常等明顯的功能差異，但是測定更多的生理性的血小板功能卻很困難。

PFA-100（血小板功能分析儀：非專利文獻2）是測定孔堵塞的系統，所述孔堵塞是通過與固定化的膠原蛋白接觸、剪切應力、與血小板誘導物質接觸而引起綜合性的血小板活化的孔堵塞。與目前單獨的由血小板活化誘導物質的刺激引起的血小板凝集相比，這是一種更接近生理性環境的測定系統。但是，無法調節數據波動以及經過孔的血液中含有的誘導物質的濃度，因此，無法適宜地測定血栓癥發病引起的血小板已被活化的患者中發現的血小板活化誘導物質濃度非常低或不存在的情況下誘導的血小板凝集，以及血小板功能異常患者中測定血小板功能的情況下由極高濃度的血小板誘導物質刺激引起的血小板凝集能力。

此外，專利文獻1中公開了一種測量血小板功能的方法，其特征在于，使血液經過毛細管內部，然后經過分隔件的開口部；隨后，測定血栓形成堵塞開口部所需的時間。在該方法中，加入大量血小板活化試劑，在生物體內血小板被活化而使血小板數量減少的情況或血小板數量正常但血小板功能弱的情況等情況下，很難測定反映生物體狀況的詳細的血小板功能。

專利文獻

專利文獻1：特開2007-298511號公報

非專利文獻

非專利文獻1：血小板凝集能検査（血小板凝集能力檢測），Thrombosis?and?Circulation,vol.12,No.4,p17-20,2004

非專利文獻2：PFA-100による血小板凝集能測定（由PFA-100P測定血小板凝集能力），Thrombosis?and?Circulation,vol.13,No.3,p90-94,2005

發明內容

例如，敗血癥、彌散性血管內凝血綜合征（DIC）等疾病中，由于血管內皮紊亂和血栓形成，血小板處于被活化的狀態，進一步地，還形成血小板與白細胞的復合體等。此外，持續的血栓形成引起血小板顯著被消耗，盡管生物體內有血栓形成，但同時還有出血癥狀。

目前的血小板功能檢驗中，難以進行嚴格反映這種癥狀的檢測。

例如，在濁度法中，即使血小板數量減少，如果對于血小板誘導物質的反應性依然亢進，則判斷血小板功能亢進（增強）。此外，對于生物體內的炎癥反應等形成的血栓形成有較大影響的血小板-白細胞復合體在用于制成富含血小板的血漿進行離心分離時與紅細胞共同沉淀，因此，在富含血小板的血漿中不含有該成分。

此外，在使用PFA-100的情況下，由于無論血小板功能強的患者還是血小板功能弱的患者均在相同濃度的誘導物質下進行測定，因此，無法適當地進行檢測以確認在沒有誘導物質或誘導物質含量很少的狀態下引起的自然凝集誘導或確認對于給予抗血小板藥物的患者中在誘導物質濃度非常高的情況下該藥物的效果。此外，即使通過PFA-100測定時堵塞時間延長的情況下，也難以進行血小板功能弱的情況和血小板功能亢進（生物體內受到活化）但血小板數量少的情況之間的數據比較等。

鑒于上述情況，本發明的課題是提供一種在與血流同等環境下，使用微量血液可高效、正確地評價血小板功能的裝置和方法。