[發明專利]檢測蠟樣芽孢桿菌的免疫膠體金試紙及其制備方法

無效

• 申請號: 201110461038.5
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN102590513A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 張金蘭;趙燕;王夫杰;張建;渠巖
• 申請（專利權）人: 北京市食品釀造研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明所屬的技術領域?

本發明涉及一種檢測蠟樣芽孢桿菌的免疫膠體金試紙及其檢測方法，同時還涉及該試紙相關試劑的制備方法。?

發明的背景技術?

蠟狀芽孢桿菌廣泛存在于土壤、空氣、水和塵埃中，因此無法避免地會污染到食品中。幾乎所有種類的食品都曾被報道與蠟狀芽孢桿菌引發的食物中毒有關，主要有：乳品、米、蒸煮的米飯和炒飯、調料、干制品(面粉、奶粉等)、豆類和豆芽、肉制品、焙烤食品等。?

所有芽孢桿菌種類能形成熱穩定內生孢子，蠟樣芽孢桿菌孢子是食源性疾病的一個重要因子。孢子的D95℃從低于1min到超過30min，觀察不到孢子的新陳代謝活動，但孢子可以在沒有營養的條件下存活許多年。內生孢子是休眠、硬的和非再生結構。內生孢子最初的功能是確保細菌能承受環境壓力。孢子高度耐熱、干燥、有毒化學物質、UV射線、γ射線和其他不利的環境因素。芽孢桿菌孢子是最耐受滅活的生命形式?

蠟狀芽孢桿菌是條件致病菌，偶爾能導致人的眼部感染，甚至是心內膜炎、腦膜炎和菌血癥等疾病，但最常見的是導致兩種不同類型的食物中毒：腹瀉型和嘔吐型。一般認為腸毒素在胃中會被破壞，所以腹瀉型食物中毒是由殘留下來的蠟狀芽孢桿菌(芽孢或菌體)在小腸中生長、產腸毒素引起的，具體過程尚未完全明了。多數情況下，引起該類食物中毒的食品中蠟狀芽孢桿菌的數量在105～108CFU/g，也有在數量較低的情況下(10³～10⁴CFU/g)導致食物中毒的。其癥狀類似于產氣莢膜梭狀芽孢桿菌(Clostridium?perfringens)食物中毒：水樣腹瀉、腹部痙攣和疼痛，嘔吐很少見。常因食用肉類、海鮮、乳品和蔬菜等食物引起，潛伏期一般為6～15h，一般持續24h；而致嘔吐的毒素是該菌在食物中預先產生的，該毒素非?常穩定，進入人體后在胃中與其受體5-HT3結合，導致嘔吐。所以盡管有時食物中檢出的蠟狀芽孢桿菌數量很低(10²CFU/g)，卻仍能引發嘔吐中毒。嘔吐型食物中毒的潛伏期一般為0.5～6h，一般限于富含淀粉質的食品，特別是炒飯和米飯。主要癥狀為惡心、嘔吐，有時有腹瀉、頭暈、發燒和四肢無力等癥狀，與金黃色葡萄球菌(Staphylococcus?aureus)引發的食物中毒相似。從目前的報道看，由蠟狀芽孢桿菌引起的食物中毒在亞洲以嘔吐型比較常見，而在歐洲和北美地區則以腹瀉型更常見。?

目前，食品中蠟樣芽胞桿菌的檢測主要采用傳統的細菌分離及生化鑒定方法，該法費時費力，極大限制了在食品加工中對該菌污染的有效監控.為提高食品安全性，建立一種快速靈敏的檢測方法十分必要。?

免疫層析法(Immunoehromatography)是20世紀90年代興起的一種快速診斷技術，膠體金免疫層析技術(GICA)就是利用膠體金本身的顯色特點結合免疫層析技術診斷特異性的待測物而發展起來的。在該技術基礎上研制的膠體金免疫層析試紙條具有特異性強、靈敏度高、制作方便、價格低廉、容易操作、結果直觀、無須儀器設備等優點，滿足了現場快速檢測及實時監測等方面的要求，具有廣泛的應用價值。本發明所解決的問題?

本發明以蠟樣芽孢桿菌作為檢測對象，可以同時檢測蠟樣芽孢桿菌菌體和芽孢，可以克服傳統方法檢測中無法區分蠟樣芽孢桿菌菌體和芽孢的缺點。結合膠體金免疫層析技術使本發明的檢測方法更加特異、快速、針對性強，實用和方便。?

發明內容

本發明提供了一種檢測樣品中蠟樣芽孢桿菌的免疫膠體金試紙及其制備方法。該試紙條由樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙及PVC底板組成。PVC背襯一端依次粘有樣品墊、膠體金墊、中間部附?有硝酸纖維素膜、另一端粘附有吸水紙。所述樣品墊與所述膠體金墊之間有搭接；所述硝酸纖維素膜與膠體金墊之間有搭接；所述硝酸纖維素膜與吸水紙之間有搭接；所述膠體金墊是有吸附有膠體金標記的抗蠟樣芽孢桿菌的單克隆抗體的玻璃纖維素膜構成，所述硝酸纖維素膜上分別包被有抗蠟樣芽孢桿菌多克隆抗體構成的檢測線和兔抗鼠的lgG構成的質控線。?

用于檢測蠟樣芽孢桿菌的免疫膠體金試紙條及其制備方法，填補了目前國內尚未有檢測蠟樣芽孢桿菌免疫膠體金試紙條的空白和檢測蠟樣芽孢桿菌菌體和芽孢的快速檢測方法的空白。本發明具有以下優點：?

1、本發明的檢測蠟樣芽孢桿菌的免疫膠體金試紙條，具有特異性強、靈敏度高、檢測時間短的優點。?

2、本發明的檢測試紙條不需要特殊儀器、設備，技術簡單，檢測成本低。?

該試紙的制備方法包括以下步驟：?

1)抗原的制備?