[發明專利]基于電荷網絡的異二聚體FC改造方法及異二聚體蛋白的制備方法

有效

• 申請號: 201110459100.7
• 申請日: 2011-12-31
• 公開（公告）號: CN102558355A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 徐霆;須濤;郭康平;汪晶晶;楊東;吳杰;黃艷;惲麗紅
• 申請（專利權）人: 蘇州康寧杰瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C07K16/00;C12P21/00;C12N15/11;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 韓朝暉

技術領域

本發明涉及一種制備異二聚體抗體FC相關的蛋白和多肽的方法，也涉及異二聚體抗體FC蛋白及多肽本身，包括組成異二聚體抗體FC的單獨的多肽；本發明還涉及編碼這些多肽的核酸序列，以及包含一個或者多個異質FC蛋白或者多肽的藥物組份。

技術背景

單克隆抗體藥物在近十五年內增長迅速，成為制藥行業的成長點。自1996年起，一共有30個左右單抗藥物被批準上市。其中有九個單抗藥物年銷售超過十億美元。2010年單抗藥物總銷售超過300億美元，并且年增長率超過10％。由于單克隆抗體的靶標特異性強，只能抑制單一靶點。而在多種疾病中，包括腫瘤，自體免疫，需要抑制多重信號通路來避免代償效應。對于病毒感染疾病，由于病毒的高突變率，往往需要抑制多抗原位點來防止逃逸。另外，雙功能抗體、蛋白被用于特異激活人體免疫系統(Wolf，Hofmeister?et?al.″BiTEs：bispecific?antibody?constructs?with?unique?anti-tumor?activity.″Drug?Discov?Today?10(18)：1237-1244.2005)。抗體的Fc區形成同二聚體，同時Fc對維持抗體和Fc融合蛋白的體內穩定性起關鍵作用。通過改造Fc使之形成異二聚體是產生多功能抗體、蛋白，并且維持其體內穩定性的有效方法。

異二聚體的一個典型應用的例子是雙特異抗體，雙特異抗體(Bispecific?antiboy，BsAbs)是含有兩個不同配體結合位點的免疫球蛋白分子。雙特異抗體至少可以對兩個不同抗原具有活性(Carter，P.″Bispecific?human?IgG?by?design.″J?Immunol?Methods?248(1-2)：7-15.2001)，它取代了經典的抗體fab兩臂相同的序列，而是用兩個不同的fab序列，因此Y型兩臂可以結合不同的抗原。雙特異抗體在癌癥治療中的應用已經被多篇文獻所綜述(Carter?2001；Chames?and?Baty.″Bispecific?antibodies?for?cancer?therapy.″Curr?Opin?Drug?Discov?Devel?12(2)：276-283.2009；Chames?and?Baty.″Bispecific?antibodies?for?cancer?therapy：the?light?at?the?end?of?the?tunnel？″MAbs?1(6)：539-547.2009)。BsAbs的一臂可以連接腫瘤細胞表面的相關抗原而另外一臂則可以觸發免疫效應細胞進一步殺傷細胞，通過免疫體系來殺死癌癥腫瘤細胞。其他雙特異抗體的應用可以查看美國專利U.S.Pat.Nos?5,731,168和7,183,076。

自然狀態下不存在雙特異性抗體，只能通過特殊方法進行制備。以往雙特異抗體的制備方法有化學交聯法，雜合F(ab′)2分子法和鼠雜交瘤法等。化學交聯法生產雙特異抗體的異源性，批與批之間的不穩定性，以及抗體特異性易受某些修飾或不當連接而改變的特性，使得該法生產的雙特異抗體不適于體內使用。以巰基交聯蛋白酶消化片斷F(ab′)生產的雙特異雜交分子，成分雖較均一，但費時費力，且產量很低。雜交瘤法生產的雙特異抗體，來源可靠，但由輕鏈、重鏈隨機配對產生的多種可能抗體形式，使得雙特異抗體生產、純化變得非常困難。