[發(fā)明專利]西門塔爾牛蜘蛛腿綜合征致病位點(diǎn)熒光自動(dòng)化檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110457936.3
• 申請(qǐng)日: 2011-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN102533994A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王雅春;焦士會(huì);初芹;俞英;張勝利;孫東曉;張毅;張沅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.一種西門塔爾牛蜘蛛腿綜合征致病位點(diǎn)熒光自動(dòng)化檢測(cè)分析PCR用引物，其核苷酸序列如下：

5’-CTGAGTCTCCTCTTCTGTTTTCA-3’，

5’-GTTGGCATCTGAGTCCAGGT-3’。

2.如權(quán)利要求1所述引物，其特征在于，還包括與引物配合使用的熒光染料。

3.如權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，所述染料為FAM、HEX或TET。

4.含權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述引物的檢測(cè)試劑盒。

5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，其還包括：DNA裂解液、熒光引物PCR反應(yīng)液、熒光電泳標(biāo)準(zhǔn)品、陰性模板和/或陽(yáng)性模板。

6.一種檢測(cè)西門塔爾牛蜘蛛腿綜合征致病位點(diǎn)方法，其特征在于，所用引物為權(quán)利要求1所述引物，或所用試劑盒為權(quán)利要求2或3所述的試劑盒，其具體包括以下步驟：

包括以下步驟：

1)目的基因的擴(kuò)增

以西門塔爾牛組織細(xì)胞DNA為模板，進(jìn)行PCR反應(yīng)，回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

2)基因分型

對(duì)上述PCR產(chǎn)物利用熒光毛細(xì)管電泳或者熒光聚丙烯酰胺凝膠電泳分型。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增條件為95℃預(yù)變性5min，然后95℃變性30s、60℃退火30s、72℃延伸30s，共35個(gè)循環(huán)，72℃最終延伸10min。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述引物用量為1.5μL，引物的終濃度為10μM。

9.權(quán)利要求6～8任意一項(xiàng)所述方法在牛抗病育種中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述牛為西門塔爾牛。