[發(fā)明專利]信號(hào)放大型免疫熒光探針及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110456124.7
• 申請(qǐng)日: 2011-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN102565383A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳堅(jiān);陳春香
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吳堅(jiān)
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.一種信號(hào)放大型免疫熒光探針的制備方法，包括：

(1)在縮合劑的存在下，將對(duì)苯二胺和均苯三甲酸加入有機(jī)溶劑中，于80-100℃縮合反應(yīng)3-5h，得到多羧基大分子；

(2)將步驟(1)得到的多羧基大分子加入含有1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺的溶液中進(jìn)行活化；然后加入抗體，反應(yīng)0.5-2h；再加入聚賴氨酸，繼續(xù)反應(yīng)0.5-2h，得到表面連接有抗體和聚賴氨酸的多羧基大分子；

(3)用熒光標(biāo)記物對(duì)步驟(2)制得的表面連接有抗體和聚賴氨酸的多羧基大分子進(jìn)行標(biāo)記，制得信號(hào)放大型免疫熒光探針。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的縮合劑為三苯基亞磷酸鹽與吡啶的混合物；所述的有機(jī)溶劑為N-甲基-2-吡咯烷酮。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述對(duì)苯二胺與均苯三甲酸的摩爾比為1∶0.8-1∶1.2。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述步驟(1)得到的多羧基大分子、抗體和聚賴氨酸的摩爾比為1∶2∶20-1∶3∶50。

5.一種信號(hào)放大型免疫熒光探針的制備方法，包括：

(1)將抗體加入生物素溶液中，攪拌反應(yīng)1-2h，然后加入熒光標(biāo)記物進(jìn)行標(biāo)記，制得熒光標(biāo)記的抗體-生物素復(fù)合物；

(2)將聚賴氨酸加入生物素溶液中，攪拌反應(yīng)1-2h，然后加入熒光標(biāo)記物進(jìn)行標(biāo)記，制得熒光標(biāo)記的聚賴氨酸-生物素復(fù)合物；

(3)將步驟(1)制得的熒光標(biāo)記的抗體-生物素復(fù)合物與鏈霉親和素溶液混合，反應(yīng)0.5-1h；然后加入步驟(2)制得的熒光標(biāo)記的聚賴氨酸-生物素復(fù)合物，繼續(xù)反應(yīng)0.5-1h，制得信號(hào)放大型免疫熒光探針。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述抗體與生物素的摩爾比為1∶2-1∶4。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述聚賴氨酸與生物素的摩爾比為1∶1-1∶2。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述熒光標(biāo)記的抗體-生物素復(fù)合物、鏈霉親和素與熒光標(biāo)記的聚賴氨酸-生物素復(fù)合物的摩爾比為1∶3∶10-1∶5∶15。

9.一種采用如權(quán)利要求1-8任一所述的制備方法制得的信號(hào)放大型免疫熒光探針。

10.如權(quán)利要求9所述的信號(hào)放大型免疫熒光探針在熒光免疫檢測(cè)中的應(yīng)用。