[發明專利]一株具有治療腹瀉作用的丁酸梭菌及其作為丁酸鈉替代品的應用

有效

• 申請號: 201110454790.7
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN102559550A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 單寶龍;谷巍;王紅;翟延慶;郭洪新
• 申請（專利權）人: 山東寶來利來生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/145
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

1.一株具有治療腹瀉作用的丁酸梭菌，其特征在于：該菌株命名為丁酸梭菌Clostridium?butyricum?Cb-2，已于2011年11月09日保藏于中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為：CCTCC?M?2011384。

2.根據權利要求1所述的具有治療腹瀉作用的丁酸梭菌，其特征在于：為專性厭氧的革蘭氏陽性芽孢桿菌，其直徑為0.6μm～1.2μm×3.0μm～7.0μm，兩端鈍圓，中間部分輕度膨脹，細菌呈直桿狀或稍有彎曲，單個或成對，短鏈，偶見有絲狀菌體，周身鞭毛，能運動；該菌株能產酸產氣，能分解蔗糖、葡萄糖、果糖、麥芽糖、蜜二糖、淀粉，不能分解松三糖、木糖，不能使明膠液化，還原石蕊，凝固牛乳，凝塊碎裂不消化，最佳生長溫度為37℃，最佳生長pH值為7.0。

3.權利要求1所述的具有治療腹瀉作用的丁酸梭菌在制備微生態制劑中的應用。

4.權利要求1所述的具有治療腹瀉作用的丁酸梭菌作為丁酸鈉替代品的應用。

5.一種具有治療腹瀉作用的丁酸梭菌制劑，其特征在于：是通過培養權利要求1所述的具有治療腹瀉作用的丁酸梭菌得到的。

6.權利要求5所述的具有治療腹瀉作用的丁酸梭菌制劑的制備方法，其特征在于，具體培養步驟如下：

(i)菌種：選用丁酸梭菌Clostridium?butyricum?Cb-2，CCTCC?M?2011384；

(ii)實驗室培養：將上述丁酸梭菌的凍干粉菌種一環接種于培養基上，無菌操作，封上石蠟凡士林，35～42℃下厭氧培養24～38h；

(iii)制備液體種子：采用5000mL三角瓶，培養基裝量1000mL/5000mL三角瓶，115℃滅菌20min，冷卻后接種，接種量3％～8％，在35～42℃條件下，厭氧培養14～38h，即為液體種子；

(iv)種子罐發酵：采用50L種子罐，培養基裝量為30L；實消溫度115～121℃，時間15～30min；待培養基溫度降為40℃時接種，接種量3％～8％，罐壓0.05MPa，在35～42℃條件下，厭氧培養12～38h，轉入發酵罐培養；

(v)發酵罐培養：采用0.5T發酵罐，培養基裝量為350L；實消溫度115～121℃，時間15～30min，待培養基溫度降為40℃時接種，接種量3％～8％，罐壓0.05MPa，厭氧培養16～32h，

(vi)發酵結束后，立即將發酵液離心并用清水清洗，如此反復2～3遍后冷凍干燥，粉碎，即為菌粉成品；或：發酵結束后，立即噴霧干燥，即得菌粉成品；

上述步驟(ii)(iii)、(iv)中所述培養基配方為：葡萄糖10g/L、胰蛋白胨5g/L、酵母膏3g/L、牛肉浸膏5g/L、碳酸鈣10g/L，使用時，調節pH至6.5～7.5，115℃條件下滅菌20min；步驟(v)中所述培養基配方為：葡萄糖10g/L、蛋白胨20g/L、酵母膏15g/L、碳酸鈣10g/L、硫酸鎂0.2g/L、磷酸氫二鉀2g/L，硫酸錳0.2g/L，使用時，調節pH至6.5～7.5。

7.權利要求5所述的具有治療腹瀉作用的丁酸梭菌制劑在制備微生態制劑中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：應用時，丁酸梭菌制劑單獨作為有效成分與玉米淀粉制成微生態制劑，或：丁酸梭菌制劑與其它至少一種菌制劑以及玉米淀粉混合制成復合微生態制劑。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于：所述其它菌制劑為乳酸菌、芽孢菌或/和雙歧桿菌的常規菌制劑。