[發明專利]一種可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌及其構建無效
| 申請號： | 201110453684.7 | 申請日： | 2011-12-29 |
| 公開（公告）號： | CN102433293A | 公開（公告）日： | 2012-05-02 |
| 發明（設計）人： | 李爽;王菊芳;楊曉鋒;王小寧;于平儒 | 申請（專利權）人： | 華南理工大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/74;C12P7/56;C12R1/01;C12R1/145 |
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| 地址： | 510640 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 發酵 生產 光學 乳酸 工程 及其 構建 | ||
1.一種可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌，其特征在于是由以下步驟構建得到：
(1)合成卡那抗性基因，并將其插入到大腸桿菌和嗜熱厭氧桿菌穿梭載體中；
(2)PCR擴增乙酸激酶編碼基因的某一段序列，為pta-up序列；再將pta-up序列插入到步驟(1)的已插入卡那抗性基因的大腸桿菌和嗜熱厭氧桿菌穿梭載體中，構建得到自殺載體1；
(3)PCR擴增磷酸轉乙酰酶編碼基因的某一段序列，為ack-down序列；再將ack-down序列插入到自殺載體1中，獲得自殺載體pPuKAd；
(4)將自殺載體pPuKAd轉化入嗜熱厭氧桿菌，并經抗性篩選后得到可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌。
2.根據權利要求1所述的可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌，其特征在于：步驟(2)所述的某一段序列為乙酸激酶編碼基因的N端部分序列。
3.根據權利要求1所述的可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌，其特征在于：步驟(3)所述的某一段序列為磷酸轉乙酰酶編碼基因的C端部分序列。
4.根據權利要求1所述的可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌，其特征在于：步驟(1)所述的大腸桿菌和嗜熱厭氧桿菌穿梭載體為pUC18、pUC19、pBluescript?II?SK(+)、pSGD8或pSGD9。
5.根據權利要求1所述的可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌，其特征在于：步驟(1)所述的大腸桿菌和嗜熱厭氧桿菌穿梭載體為pBluescript?IISK(+)。
6.根據權利要求1所述的可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌，其特征在于：步驟(4)所述轉化的方法為熱激法、電轉化法、結合轉化或雙親本雜交。
7.根據權利要求1所述的可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌，其特征在于：步驟(4)所述的嗜熱厭氧桿菌為嗜熱厭氧桿菌屬Thermoanaerobacterium?sp.或梭菌屬Clostridium?sp.。
8.根據權利要求1所述的可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌，其特征在于：步驟(4)所述的嗜熱厭氧桿菌為嗜熱厭氧桿菌(Thermoanaerobacterium?aotearoence?SCUT27)。
9.權利要求1-8任一項所述的可利用木糖發酵生產光學純L-乳酸的工程菌在發酵生產光學純L-乳酸中的應用。
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