[發明專利]磺胺二甲基嘧啶親和膜及其在抗體分離純化中的應用

有效

• 申請號: 201110449444.X
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN102553467A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 應國清;朱麗;易喻;梅建鳳;王鴻;陳建澍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: B01D71/82
• 分類號: B01D71/82;B01D71/16;B01D67/00;C07K1/22
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;俞慧

一、技術領域

本發明涉及生物醫學材料領域，特別是涉及磺胺二甲基嘧啶親和膜的制備及其在抗體分離純化中的應用。

二、背景技術

抗體是在對抗原刺激的免疫應答中，B淋巴細胞產生的一類蛋白。它是能與相應抗原特異的結合、產生各種免疫效應(生理效應)的球蛋白。作為一種特殊的蛋白質分子，抗體常被作為體外診斷的試劑、治療疾病的藥物、免疫親和層析的配基等，在生命科學研究、生物技術及醫學領域中有著廣泛的應用。尤其是抗體作為各種免疫分析的核心試劑，對免疫分析結果的靈敏度、特異性起著至關重要的作用。在對一些與生命體功能關系密切的新基因產物的研究中，是否擁有相應的抗體以檢測與鑒定新基因的產物蛋白質，是整個研究工作能否深入開展的關鍵。

目前常用的分離純化抗體的方法有鹽析法、正辛酸-飽和硫酸銨法、親和層析法、凝膠過濾層析法、疏水層析法、以及離子交換層析法等，但前兩種種方法只能得到純度不是很高的抗體；親和層析雖然選擇性較好，但存在著裝柱、預處理等耗時步驟，且處理量較小；凝膠過濾層析、疏水層析、以及離子交換層析同樣也存在在處理量小，時間長，裝柱等問題。

80年代中期以來，出現了親和膜分離技術。它將兩種技術有機地結合起來，發揮各自的優點，彌補不足，不僅利用了生物分子的識別功能，可以高選擇地分離低濃度的生物產品，而且利用膜的滲透通量大的特點，能在較低的操作壓和較高的流速下對目標蛋白進行快速的分離和純化；操作方便、設備簡單。目前利用親和膜已能純化和制取白蛋白、單克隆抗體、干擾素、纖維蛋白、胰蛋白酶及其抑制劑等醫藥制品，并在醫學檢驗、體外循環治療技術等領域顯示出廣闊的應用前景，受到日益廣泛的關注。親和膜分離技術把親和色譜與膜分離技術結合起來，利用生物分子的識別功能分離低濃度的生物產品，并以對流傳質方式實現快速分離，具有易于放大、分離速度快的特點，又具備親和層析選擇性好、分離精度高的優勢，是備受關注的生物產品純化分離技術。

三、發明內容

本發明要解決的第一個技術問題是提供一種磺胺二甲基嘧啶親和膜，所述的磺胺二甲基嘧啶親和膜對抗體(尤其是免疫球蛋白IgG)有特異性吸附作用，所得抗體具有較高的純度和活性，適用于大規模分離純化抗體。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一種磺胺二甲基嘧啶親和膜，所述的磺胺二甲基嘧啶的制備方法包括如下步驟：

(1)取醋酸纖維素膜，先在堿性條件下充分水解，然后加入環氧氯丙烷進行環氧活化，反應結束后在抽濾條件下用去離子水洗至中性，得到環氧活化后的膜；

(2)將磺胺二甲基嘧啶溶解于pH?10～12的堿性緩沖溶液中，然后將步驟(1)獲得的環氧活化后的膜分散在上述溶液中，在50～65℃反應24h～36h，在抽濾條件下用去離子水洗至濾出液在280nm處的紫外吸收接近于0，干燥后即得磺胺二甲基嘧啶親和膜。

本發明選用醋酸纖維素的膜為基膜，這是因為醋酸纖維素膜非特異性吸附比較低，活化方法較簡便，故其相對于硝酸纖維素膜和混合纖維素膜等更適合作為本發明的基膜。本發明所述的醋酸纖維膜使用市售商品。

本發明在制備親和膜過程中，需先對醋酸纖維膜進行水解處理，以提高膜上配基的修飾密度。本發明推薦所述醋酸纖維素膜的水解在1.5～2mol/LNaOH溶液中進行，水解溫度為60～80℃，水解時間為1.5～2.5h。

本發明中，為提高環氧活化效果，優選環氧活化溫度為40～60℃，優選環氧活化時間為4～6h。

本發明優選所述環氧氯丙烷的加入體積為水解后反應體系體積的15％～20％。

本發明中，所述磺胺二甲基嘧啶的加入質量優選為環氧活化后的膜質量的10％～20％。

本發明中，所述的pH?10～12的堿性緩沖溶液優選為pH?10～12的PBS緩沖溶液或碳酸鹽緩沖液。

本發明以醋酸纖維膜作為基膜，通過對反應步驟的設計和反應條件的控制，獲得了具有較好配基修飾密度的磺胺二甲基嘧啶親和膜。

本發明要解決的第二個技術問題是將所述的磺胺二甲基嘧啶親和膜應用于抗體分離純化中的應用，以獲得具有較高純度和活性的抗體。