[發明專利]用于上皮組織腫瘤細胞的檢測劑組合物及其制備方法

有效

• 申請號: 201110449270.7
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN103185713A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 閆文廣
• 申請（專利權）人: 閆文廣
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 封新琴

技術領域

本發明涉及一種檢測劑組合物，特別涉及一種用于上皮組織腫瘤細胞的基于顏色變化的檢測劑組合物。本發明還涉及制備所述檢測劑組合物的方法，以及包含所述檢測劑組合物的試劑盒。

背景技術

目前，用于對人體上皮組織腫瘤細胞進行活體染色的方法主要有基于乙酸白化反應的方法、碘實驗、甲苯胺藍實驗、亞甲基藍染色、蘇木素染色等。

具體而言，乙酸白化反應是通過將乙酸溶液，例如3-5％的乙酸溶液，涂抹在宮頸/陰道上皮組織上，等待一段時間之后觀察所涂抹的上皮組織有無乙酸白化反應區，如果有白化區，則該上皮組織懷疑有腫瘤細胞。然而，此方法雖然敏感性高，但是特異性差，因為除了腫瘤細胞之外，部分炎癥細胞也可以產生乙酸白化反應，因而產生假陽性的結果。并且該方法的特異性受操作者的技術水平和經驗影響較大。

碘實驗的原理是糖原反應，是將盧戈氏碘液涂抹在宮頸上皮組織上，然后通過觀察上皮細胞的碘染現象來進行的檢測。其中，正常上皮呈赤棕色或黑色，而異常上皮呈厚的芥末黃或土黃色。但是，在上皮有炎癥時，這些區域可能不會受到染碘，或是呈現無色的裝填，所以碘實驗對上皮細胞染色的特異性較低^[1]。

使用甲苯胺藍的方法易使中性白細胞和細菌的核碎片著色，導致較多假陽性，對表面有角化的粘膜白斑和癌不易著色，易造成假陰性^[2]。

上皮組織蘇木素染色后需要借助高倍顯微鏡進行觀察，操作相對復雜，對操作者的專業技術和經驗要求較高，且檢查費時較長。

亞甲基藍與癌細胞的親和性使惡性組織易于染成藍色，有研究將其用于食道上皮組織的定位活檢取材，其具有提高活檢陽性率的作用^[3]。但是，現有技術中還沒有將亞甲基藍的氧化還原變色反應與葉酸、葉酸復合物組合使用，通過染色和顏色變化反應快速定位和檢測上皮腫瘤細胞的報道。

本領域急需一種準確率高、特異性強、操作簡便快捷的對上皮組織腫瘤細胞通過染色和顏色變化進行檢測的組合物，特別是用于宮頸/陰道上皮組織腫瘤細胞。

發明內容

本發明的發明人發現，利用葉酸和/或葉酸復合物與腫瘤細胞中過度表達的葉酸受體的相互作用，并結合亞甲基藍在氧化還原作用中的顏色變化，能夠迅速、準確地對異常的上皮組織進行特異性染色，進而將其與正常組織進行區分，并通過本發明組合物的顏色變化快速顯示受試的組織細胞是否為腫瘤細胞，由此提供了迅速、簡易、準確、靈敏的對異常上皮組織的定位和檢測，由此完成了本發明。本發明的檢測劑組合物敏感性高、特異性高，操作簡便，檢查時間短，且操作者不需技術培訓。除此之外，亞甲基藍作為一種在臨床上廣泛使用的試劑，具有有效、安全、低廉并且容易獲得的優點，從而使得本發明的組合物和方法也具有這些優勢。

因此，本發明提供了一種檢測劑組合物，所述組合物包含以下組分(按重量百分比計)：

在上述檢測劑組合物的優選實施方案中，葉酸的含量優選為0-4.5％，更優選為0-1％。

在另一個優選的實施方案中，葉酸復合物的優選含量為0-8％，更優選為0-1％。

在另一個優選的實施方案中，亞甲基藍的含量優選為0.05-4.5％，更優選為0.05-0.5％。

在另一個優選的實施方案中，乙酸的含量優選為3-5％。

本發明的檢測劑組合物中所用的糖類還原劑包括各種糖類及其衍生物，優選葡萄糖、果糖、半乳糖、己糖、乳糖、麥芽糖及其衍生物等。

本發明的另一個方面涉及制備本發明的檢測劑的方法，所述方法依次包括以下步驟或由以下步驟組成：

(a)按上述重量百分比將葉酸和/或葉酸復合物溶于含水溶劑中形成溶液，

(b)按上述重量百分比將亞甲基藍加入到溶液(a)中攪拌溶解，

(c)按上述重量百分比將糖類還原劑加入溶液(b)中，

(d)將步驟(c)中獲得的溶液攪拌30分鐘，

(e)按上述重量百分比將乙酸加入溶液(d)中攪拌混合，

上述各步驟都是在常溫和常壓下進行的。

在優選的方面，根據本發明的檢測劑或根據本發明的方法制備的檢測劑用于上皮組織腫瘤細胞。

本發明還涉及一種檢測上皮組織病變的方法，所述方法包括：

(a)將本發明的活細胞檢測劑借由載體施用于受試者的上皮組織表面；

(b)觀察載體上的顏色變化；

(c)根據顏色變化決定所測試的上皮組織是否產生病變。