[發明專利]一種人肺腺癌蛋白質標志物Flotillin-1的應用方法

有效

• 申請號: 201110440696.6
• 申請日: 2011-12-26
• 公開（公告）號: CN102539758A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 張鵬飛;肖志強;陳主初;李萃;易紅;李茂玉;彭芳
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所 43114
• 代理人: 袁靖

技術領域

本發明涉及一種用作人肺腺癌標志物的質膜蛋白Flotillin-1的應用方法。

背景技術

肺癌是最常見的惡性腫瘤，其發病率和死亡率已居惡性腫瘤之首，嚴重威脅人類健康。作為肺癌的一類，肺腺癌在各類肺癌中約占20∽30％。近年來，人肺腺癌的發病率呈逐步上升，且病人的死亡率高，預后差。臨床上，肺腺癌發病較隱匿，在早期一般沒有明顯的臨床癥狀，大多數患者就診時已發生癌細胞的侵襲或轉移，且無有效判斷肺腺癌癌變的標志物。因此，尋找肺腺癌的有效標志物，準確判斷肺腺癌的臨床分期和預后成為廣大醫學研究者的迫切任務。

發明內容

本發明中的Flotillin-1是脂筏的一種標記蛋白。人Flotillin-1基因(Genebank登錄號ID?10211)位于染色體6p21.3區段，全長15kb，由13個外顯子和12個內含子組成。flotillins蛋白被認為是屬于SPFH(stomatins，prohibitins，flotillins，HflK/C)蛋白家族。人Flotillin-1蛋白由427個氨基酸組成，(蛋白質登錄號O75955，www.expasy.org)它在體內廣泛表達，而且高度保守，這就提示著它可能在不同的組織和細胞內發揮著不同的作用，但其在肺腺癌中確切的功能不清楚。

發明內容

本發明的目的是提供一種人肺腺癌蛋白質標志物Flotillin-1的應用方法；為有效判斷肺腺癌癌變進程提供科學依據。

一種人肺腺癌蛋白質標志物Flotillin-1用于制備診斷、預測、檢測或篩查人肺腺癌的制劑；特別是用于制備診斷、預測、檢測或篩查人肺腺癌的試劑盒。

一種人肺腺癌蛋白質標志物Flotillin-1還可以用于制備診斷、預測、檢測或篩查人肺腺癌癌細胞擴散、肺腺癌淋巴結轉移、肺腺癌臨床分期、肺腺癌患者復發的制劑；特別是用于制備診斷、預測、檢測或篩查人肺腺癌癌細胞擴散、肺腺癌淋巴結轉移、肺腺癌臨床分期、肺腺癌患者復發的試劑盒。

本發明提供了一個用于區分人肺腺癌組織以及癌旁正常肺組織、無淋巴結轉移肺腺癌組織和有淋巴結轉移肺腺癌組織的質膜蛋白標志物Flotillin-1，利用該標志物制備判斷人肺腺癌、肺腺癌擴散，肺腺癌淋巴結轉移、臨床分期、肺腺癌患者復發和預后的制劑。本發明為有效判斷人肺腺癌癌變進程提供科學依據。

附圖說明

圖1是人肺腺癌組織質膜純度鑒定圖。其中1-A是質膜純化后透射電鏡圖譜，1-B是Western?blotting檢測質膜純化前后Na⁺/K⁺ATPase(質膜標志蛋白)和Prohibitin(細粒體標志蛋白)表達情況，1-C是質膜純化前后Na⁺/K⁺ATPase和Prohibitin表達水平直方圖。WTL表示總組織裂解液，PM表示純化后的質膜。

圖2是兩次iTRQA試劑標記，LC-MS/MS分析鑒定Flotillin-1的肽序列和定量比例圖。圖2-A是114和116試劑標記癌旁正常肺組織質膜蛋白，115和117試劑標記肺腺癌組織質膜蛋白，質譜鑒定Flotillin-1的肽序列(VTGEVLDILR，m/z＝680.4019，z＝2)和比例圖。圖2-B是115和117試劑標記癌旁正常肺組織質膜蛋白，114和116試劑標記肺腺癌組織質膜蛋白，質譜鑒定Flotillin-1的肽序列LAEAEK00SQLIMQAEAEAASVR，m/z＝845.1227，z＝3)和定量比例圖。這兩個序列都Flotillin-1蛋白序列中的一段，兩次質譜分析時分別檢測得到的，通過質譜數據結合生物信息學鑒定均為Flotillin-1。

圖3是Western?blot檢測Flotillin-1在人肺腺癌組織和癌旁正常肺組織中表達。圖3-A是Western?blot檢測Flotillin-1在肺腺癌組織和癌旁正常肺組織中表達，(N表示人肺腺癌癌旁正常組織，T表示人肺腺癌組織；PNLT表示癌旁正常肺組織，AdC表示人肺腺癌組織；GAPDH蛋白作為組織內參；圖3-B是Flotillin-1在人肺腺癌組織和癌旁正常肺組織中表達水平直方圖。

圖4是免疫組化檢測Flotillin-1在癌旁正常肺組織，無轉移淋巴結肺腺癌組織和有淋巴結轉移肺肺腺癌組織中表達。4-A是Flotillin-1在癌旁正常肺組織中免疫組化圖，4-B是Flotillin-1在無轉移淋巴結肺腺癌組織中免疫組化圖，4-C是Flotillin-1在有淋巴結轉移肺肺腺癌組織中免疫組化圖。