[發(fā)明專利]一種能誘導(dǎo)抗雞β2-微球蛋白抗體的多肽及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110440566.2
• 申請日: 2011-12-26
• 公開（公告）號: CN102504020A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 秦愛建;錢琨;郁川;劉秋
• 申請（專利權(quán)）人: 揚(yáng)州大學(xué)
• 主分類號: C07K14/465
• 分類號: C07K14/465;C07K16/18
• 代理公司: 南京知識律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及合成多肽制備抗體的技術(shù)領(lǐng)域，主要是一種利用合成多肽制備抗體的方法。提供了制備雞β2-微球蛋白（chβ2M）抗體的多肽序列用其應(yīng)用。

背景技術(shù)

β2-微球蛋白（β2-M）是人們比較熟悉的由100個氨基酸組成的非糖基化多肽，分子量12kDa。所有有核細(xì)胞均能合成β2-M并與MHC?I類分子形成復(fù)合物，成為MHC-I類分子的β鏈（輕鏈）。MHC?I類分子在腫瘤免疫中有著十分重要的作用，通過MHC?I類分子細(xì)胞毒T細(xì)胞可以識別由蛋白酶降解的腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的多肽。人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些腫瘤細(xì)胞上MHC?I類分子抗原的表達(dá)，且腫瘤細(xì)胞表面MHC?I類分子的下調(diào)或缺失常與腫瘤發(fā)展的進(jìn)程相關(guān)，因為部分類型的癌細(xì)胞能夠逃避宿主免疫監(jiān)測和細(xì)胞毒T細(xì)胞的清除作用。

?MHC-I類分子將細(xì)胞表面的內(nèi)源性抗原提呈給CD8+?CTL細(xì)胞，然后CD8+?CTL殺死含病原的感染細(xì)胞，從而清除感染。在病毒感染的細(xì)胞中，許多病毒通過利用自身編碼的MHC?I類似物來保護(hù)病毒感染細(xì)胞免于被消滅，例如鼠或人的巨細(xì)胞病毒；病毒蛋白也與β2-M相互作用，作用的機(jī)制同病毒與細(xì)胞的MHC-I重鏈分子作用相類似，如人痘病毒-觸染性軟疣病毒也編碼一種MHC?I?類似物，并能與β2-M形成復(fù)合體；特納河痘病毒（Tanapox?virus，TPV）通過病毒編碼的TNF抑制因子與β2-M形成復(fù)合體以逃避抗原識別。若將Ⅰ類基因轉(zhuǎn)染給腫瘤細(xì)胞株，則惡變細(xì)胞可發(fā)生逆轉(zhuǎn)，且浸潤性與轉(zhuǎn)移性消失或降低。這可能是由于MHC-Ⅰ類抗原缺失的腫瘤細(xì)胞不能彌補(bǔ)TC識別，從而導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸。H.?D.?Hunt?等報道MDV感染OU2細(xì)胞后，MHC?I分子表達(dá)被封閉，MDV誘導(dǎo)的淋巴瘤細(xì)胞中MHC-I的表達(dá)幾乎完全缺失，β2-M的表達(dá)下調(diào)。Alon?M.?Levy?也證明了致腫瘤性MDV（RB1B）能夠顯著降低MHC?I類分子的表達(dá)，但這種作用可以被IFN消除；?Sarson?AJ發(fā)現(xiàn)MHC?I類分子和DNA?修復(fù)及程序死亡蛋白、多聚ADP-ribose、聚合酶(PARP)在MDV感染早期均下調(diào)。然而，最近的研究發(fā)現(xiàn)，雖然MDV感染早期MHC?I類分子表達(dá)下調(diào)，但在感染后期，MHC?I類分子表現(xiàn)為上調(diào)，Dalgaard?T、Niikura?M分別證明MDV?感染后期誘導(dǎo)?MHC?I?分子的表達(dá)?,?MHC?class?I?在CD4(+)細(xì)胞和CD8(+)細(xì)胞表面表達(dá)均有明顯升高，同時，這些細(xì)胞上的MHC?II類分子也有升高。??Abdul-Careem?MF?發(fā)現(xiàn)MHC?I類分子在感染雞羽囊中顯著提高。本課題組研究發(fā)現(xiàn)：在MDV感染的雞法氏囊組織中β2-M表現(xiàn)為下調(diào)，但在羽囊中卻表現(xiàn)為上調(diào)，這可能是在淋巴器官——法氏囊中，MDV通過某種途徑抑制了細(xì)胞中β2-M的產(chǎn)生，減少自身與β2-M形成復(fù)合體來逃避抗原識別，使得病毒能潛伏在淋巴細(xì)胞中而不被清除。而病毒感染雞皮膚中β2-M表達(dá)顯著上調(diào)，可能是浸潤在皮膚組織中的腫瘤細(xì)胞表達(dá)了β2-M所致。馬立克氏病毒通過降低感染細(xì)胞表面的MHC-I來逃避細(xì)胞免疫，使得其能順利建立起潛伏感染及之后的重新激活。

正常細(xì)胞和癌細(xì)胞表達(dá)的β2-M蛋白以及在臨床上的應(yīng)用已成為近年來人們研究的熱點(diǎn)。目前，有關(guān)β2-M直接致有絲分裂活性和在致癌中的細(xì)胞信號傳導(dǎo)功能尚未見報道。β2-M是一種癌細(xì)胞和炎性細(xì)胞合成和分泌的可溶性因子，幾種癌癥疾病患者的血清和尿液可以發(fā)現(xiàn)高濃度β2-M，另外β2-M的水平也是某些腫瘤包括腎臟肉瘤轉(zhuǎn)歸的重要指標(biāo)，因此，可以假設(shè)β2-M不僅是承載腫瘤的一個重要指標(biāo)，而且也是癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)歸的一個重要調(diào)節(jié)信號分子。明確β2-M在MDV腫瘤發(fā)展過程中的作用，了解β2-M下游信號通路的特點(diǎn)對全面了解MDV的致病機(jī)制，有效控制MD，為人類癌癥新的治療靶位發(fā)現(xiàn)提供借鑒，有十分重要的理論意義。而研究chβ2M的生物學(xué)功能，必須有相應(yīng)的抗體工具，快速制備抗chβ2M抗體，對進(jìn)行相應(yīng)研究具有重要作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種能誘導(dǎo)雞β2-微球蛋白（chβ2M）抗體的多肽序列以及它在抗體制備中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述的能誘導(dǎo)雞β2-微球蛋白（chβ2M）抗體，它的氨基酸序列為TPSSGSTYACKVEHETLKEPQVYKWDPEF；如SEQ?ID?NO.1所示；它來源于雞chβ2M的碳端多肽序列。

本發(fā)明所述多肽序列，是由29個氨基酸組成的多肽片段。該多肽可以刺激動物產(chǎn)生抗chβ2M特異性抗體。