[發(fā)明專利]一種定量測定RNA和DNA濃度及其比值的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110435760.1
• 申請日: 2011-12-22
• 公開（公告）號: CN102559879A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 安立會;鄭丙輝;張雷;宋雙雙;陳浩;趙興茹
• 申請（專利權(quán)）人: 中國環(huán)境科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 鄭小粵

1.一種定量測定RNA濃度和DNA濃度的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

a)配制DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液、RNA標(biāo)準(zhǔn)溶液、GelRed染料溶液，并制備待測樣品溶液；

b)將步驟a)中獲得的DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液、RNA標(biāo)準(zhǔn)溶液、待測樣品溶液分別與GelRed染料溶液混合；

c)將與GelRed染料溶液混合后的DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液、RNA標(biāo)準(zhǔn)溶液、待測樣品溶液分別加入酶標(biāo)板中；

d)分別測定所述酶標(biāo)板中DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液、RNA標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測樣品溶液的熒光值；

e)根據(jù)所述DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液、RNA標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光值制作熒光值-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，所建標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為y＝ax+b，確定a，b值；

f)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所述待測樣品的DNA濃度和RNA濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量測定RNA濃度和DNA濃度的方法，其特征在于，所述的DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液是使用0.1％的STEB稀釋DNA標(biāo)準(zhǔn)品至適當(dāng)濃度，所述的RNA標(biāo)準(zhǔn)溶液是使用0.1％的STEB稀釋RNA標(biāo)準(zhǔn)品至適當(dāng)濃度。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量測定RNA濃度和DNA濃度的方法，其特征在于，所述的待測樣品溶液是使用0.1％的STEB緩沖液稀釋樣品至適當(dāng)濃度。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的定量測定RNA濃度和DNA濃度的方法，其特征在于，當(dāng)所述的待測樣品溶液的熒光值處于所述的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光值范圍之外時(shí)，進(jìn)一步稀釋所述待測樣品溶液使其熒光值在所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光值范圍內(nèi)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量測定RNA濃度和DNA濃度的方法，其特征在于，所述的GelRed染料溶液是使用0.1％STEB緩沖液稀釋GelRed染料5000倍得到的。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量測定RNA濃度和DNA濃度的方法，其特征在于，測定所述溶液熒光值時(shí)所使用的波長：激發(fā)光的波長為250-270nm；發(fā)射光的波長為570-600nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的定量測定RNA濃度和DNA濃度的方法，其特征在于，所述激發(fā)光的波長為260nm；發(fā)射光的波長為590nm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量測定RNA濃度和DNA濃度的方法，其特征在于，所述的與GelRed染料溶液的混合包括吸取預(yù)設(shè)體積的樣品或DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液或RNA標(biāo)準(zhǔn)溶液和等體積GelRed染料溶液至離心管中，充分混勻。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定量測定RNA濃度和DNA濃度的方法，其特征在于，所述的酶標(biāo)板是黑色不透光，96孔不可拆或可拆酶標(biāo)板。