[發(fā)明專利]聚乙二醇綴合的艾塞那肽的合成及應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110435506.1
• 申請(qǐng)日: 2011-12-22
• 公開（公告）號(hào): CN102532303A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賴文;陸明;王寶利
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇弘和藥物研發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/575
• 分類號(hào): C07K14/575;C07K1/20;C07K1/107;A61K38/22;A61K47/48;A61P3/10
• 代理公司: 北京中恒高博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 高松

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種藥物，具體地，涉及一種聚乙二醇綴合的艾塞那肽的合成及應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著我國人民生活水平的提高，糖尿病人群快速增長，根據(jù)2010年的統(tǒng)計(jì)，我國糖尿病發(fā)病率達(dá)到了9.7%，絕對(duì)數(shù)字接近1億，而考慮到我國糖尿病的檢出率尚不足40%，我國的實(shí)際患病人群是非常龐大的，而在我國的糖尿病患病人群中，2型糖尿病患者超過了90%，數(shù)量已經(jīng)超過印度成為了世界第一，并且數(shù)量還在增長中。

目前，治療2型糖尿病的幾類常用藥物都有可能造成身體的不良反應(yīng)，特別是二甲雙弧，有導(dǎo)致患者乳酸性酸中毒的危險(xiǎn)性；磺服類、a-葡萄糖營酶抑制劑類和曝哇烷二酮類藥物會(huì)誘發(fā)患者體重增加；此外，2型糖尿病患者應(yīng)用口服降糖藥后物治療后會(huì)出現(xiàn)藥物失效的現(xiàn)象，外周組織對(duì)胰島素的敏感性降低。

艾塞那肽（Exendin-4）是含39個(gè)氨基酸的多肽，與人的胰高血糖素(Glucagon)有48%的同源性，與人的GLP-1有53%的同源性，可以模擬葡萄糖依賴性胰島素分泌，增強(qiáng)其它抗高血糖作用，增加胰島素的生物合成分泌，但不會(huì)引起嚴(yán)重低血糖，并具有降低食欲、減少食物的攝入、減肥、對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用等功能，被譽(yù)為“聰明的降糖藥”。雖然控制血糖效果明顯，但是艾塞那肽在人體內(nèi)的半衰期比較短，所以需要一天注射兩次來維持藥效，長效的艾塞那肽顯然將會(huì)給病患帶來生活的便利，符合大量2型糖尿病患者的需求。

隨著近年來大分子藥物的迅速發(fā)展，多肽和蛋白質(zhì)藥物的穩(wěn)定性一直是醫(yī)藥研究人員關(guān)注的熱點(diǎn)之一。有多種方式可以被用來增加大分子藥物在體內(nèi)的穩(wěn)定性，包括不同的給藥途徑（口服，鼻腔給藥，透皮吸收），不同的載體（白蛋白，脂質(zhì)體，微球），不同的高分子材料?（多糖），不同藥物釋放技術(shù)?（前藥，緩釋技術(shù)）等等。其中聚乙二醇（polyethylene?glycol，?PEG）綴合是一項(xiàng)比較常用的增加大分子藥物穩(wěn)定性的方式，該方法最早由Davis?和?Abuchowski等在20世紀(jì)70年代研究開發(fā)，活化的親電PEG或者PEG衍生物可以和多肽或者蛋白質(zhì)上的末端氨基，賴氨酸ε-胺基和半胱氨酸的巰基反應(yīng)，反應(yīng)后可以在多肽或者蛋白質(zhì)分子上連接多個(gè)聚乙二醇長鏈，綴合以后的大分子藥物，可以有效地降低免疫原性，提高穩(wěn)定性和溶解性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有的缺陷，提供了一種聚乙二醇綴合的艾塞那肽，本發(fā)明所提出的聚乙二醇綴合的艾塞那肽具有半衰期長、穩(wěn)定性好、降糖效果好的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)，本發(fā)明提出了其制備方法和應(yīng)用。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種聚乙二醇綴合的艾塞那肽，由結(jié)構(gòu)通式（Ⅰ）表示：

（Ⅰ）

式中，mPEG表示甲氧基聚乙二醇的殘基；

n取值為0-3；

R表示去除一個(gè)氨基的艾塞那肽分子，其中，所述氨基為艾塞那肽分子中賴氨酸殘基的氨基或N末端組氨酸殘基的氨基；

所述聚乙二醇綴合的艾塞那肽的分子量為9800-110000。

優(yōu)選地，n取值為1。

優(yōu)選地，聚乙二醇綴合的艾塞那肽的分子量為9800-15000。

本發(fā)明提出的聚乙二醇綴合的艾塞那肽的制備方法，包括以下反應(yīng)：

具體地，反應(yīng)過程包括以下步驟：

（1）將艾塞那肽（Ⅲ）用Tris-HCl緩沖液溶解，調(diào)節(jié)其pH為6.5-8.5；

（2）加入活化的化合物（Ⅱ），其中，艾塞那肽（Ⅲ）與化合物（Ⅱ）的摩爾比為?1：0.1-100，反應(yīng)時(shí)間為20-240分鐘，反應(yīng)的溫度為0-37℃；

（3）反應(yīng)完畢，加入超過反應(yīng)物摩爾量100倍以上的甘氨酸終止反應(yīng)，制得聚乙二醇綴合的艾塞那肽（Ⅰ）。

具體地，步驟（3）中所述聚乙二醇綴合的艾塞那肽（Ⅰ）的分離純化和分析，包括以下步驟：

（1）聚乙二醇綴合的艾塞那肽（Ⅰ）的分離純化：

將最終反應(yīng)液過濾，以反相高效液相（HPLC）色譜進(jìn)行純化，色譜條件如下：

色譜柱：?10um，20?x?250mm

流動(dòng)相：?A：?0.1%?三氟乙酸（TFA）

??????????????B：?乙腈

??????????????35%B?等度洗脫

流速：?20ml/min

檢測(cè)波長：210nm

以上述條件運(yùn)行，通過峰值進(jìn)行分離純化；

（2）聚乙二醇綴合的艾塞那肽（Ⅰ）的分析：