[發明專利]一株煙草普通花葉病毒生防惡臭假單胞菌菌株

有效

• 申請號: 201110434613.2
• 申請日: 2011-12-22
• 公開（公告）號: CN102676420A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 王鳳龍;孫惠青;錢玉梅;楊金廣;郭叢;陳德鑫;申莉莉;王新偉;戰徊旭;王秀芳;陳丹
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01N63/02;A01P1/00;C12P1/04;C12R1/40
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一株煙草普通花葉病毒生防惡臭假單胞菌(Pseudomonas?putida)菌株，菌株代號為A3，該菌株于2011年9月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC?No.5231。

2.權利要求1所述菌株A3在防治煙草普通花葉病毒中的應用。

3.權利要求1所述菌株A3與吐溫-20％混合后在防治煙草普通花葉病毒中的應用。

4.一種用權利要求1所述的煙草普通花葉病毒生防惡臭假單胞菌菌株得到得到活性小分子物質的混合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將活性菌株A3接種到NA培養基上純化，挑取單菌落保存于試管中的培養基斜面上，挑取培養基平板上生長良好的單一菌落接種到液體NB培養基中，于28℃，180rpm/min，培養64h；

2)用0.5mol/L的草酸將發酵液pH值調至2.0～3.0，靜置2h，出現蛋清狀沉淀，用滅菌紗布過濾，棄去渣滓；

3)用3倍于發酵液體積的乙酸乙酯反復萃取三次，分別收集有機相和水相，在旋轉蒸發儀上減壓濃縮至浸膏，有機相濃縮溫度控制在45℃，水相溫度控制在68℃；

4)用50倍體積的丙酮沉淀乙酸乙酯萃取的得到的粗提物，4℃靜置過夜，10000r/m，離心20min，棄去沉淀，40℃旋轉蒸發蒸去丙酮得到浸膏；

5)用甲醇溶解浸膏，再用等量去離子水混合，定容后過D-101大孔樹脂靜態吸附，然后用洗脫液進行洗脫，洗脫體系為甲醇/水，洗脫梯度為3/7，其梯度組分收集500mL，減壓濃縮成1浸膏狀物質。

5.權利要求4所述的得到活性小分子物質的混合物在煙草普通花葉病毒防治中的應用。