[發明專利]一種抗腫瘤小肽FpAT的制備方法

無效

• 申請號: 201110429066.9
• 申請日: 2011-12-20
• 公開（公告）號: CN103172704A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 王良友;陸冬冬;陳逸民
• 申請（專利權）人: 蘇州中科天馬肽工程中心有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及多肽藥物化學合成領域，具體涉及本發明涉及一種抗腫瘤小肽FpAT的制備方法。

背景技術

抗腫瘤小肽FpAT的氨基酸序列為：L-天冬氨酰-L-絲氨酰-甘氨酰-L-谷氨酰-甘氨酰-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-丙氨酰-L-谷氨酰-甘氨酰-甘氨酰-甘氨酰-L-纈氨酰-L-精氨酸。

其結構如下：

腫瘤是危害人類生命健康最嚴重的疾病之一，目前治療腫瘤的方法很多，如利用外科學、放射治療學、化學治療等，腫瘤血管阻斷療法等。其中基于血管生成與腫瘤生長、轉移的關系而發展起來的抗血管生成療法是一種較為看好的方法，為治療癌癥提供了希望。相關研究顯示，近年來內源性的抗腫瘤小肽研究發展迅速，其與傳統抗腫瘤藥物相比具有明顯的優勢，其作為信使分子針對腫瘤細胞生長發育的不同環節特異性殺傷或抑制腫瘤細胞，此外，小肽分子小，活性高，易于合成，而且無免疫源性，結構簡單，功能明確而特異，毒副作用小，作為藥物較為安全。

FpAT是北京腫瘤防治研究所壽成超等發現的具抗血管生成的內源性小肽物質，在小鼠體內有較好的抑瘤生長活性，初步實驗提示其還能延長荷瘤小鼠的生存期，具良好的開發應用前景。FpAT小肽在抗腫瘤中的應用已申請專利(申請號200610113568.X，WO2008040190A1)。

專利200610113568.X和WO2008040190A1雖然公布了一種FpAT小肽的制備方法，但是該方法沒有公開生產方法中參與反應的關鍵物料(如催化劑、反應介質等)或關鍵的反應條件，屬于肽類藥物合成的通用方法，本領域技術人員很難根據該方法公開的內容大量制備高純度的該化合物。本申請發明人經過反復試驗，提供了一條反應條件溫和、副反應少、產率高、操作簡便、適合規模化大生產、可隨時監控反應進程的Fmoc/tBu固相多肽合成策略。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種高收率、低成本、反應條件溫和并易于操作、環境污染小、有利于實現產業化的固相合成FpAT肽工藝。

2、為實現上述目的，本發明采取以下技術方案：小肽FpAT的制備方法，所述FpAT為H-Asp-Ser-Gly-Glu-Gly-Asp-Phe-Leu-Ala-Glu-Gly-Gly-Gly-Val-Arg-OH，包括以下步驟：

(1)由Fmoc-Arg(Pbf)-OH和替代度為1.0～1.3mmol/g的2-氯三苯甲基氯樹脂反應得到0.4～0.7mmol/g的Fmoc-Arg(Pbf)-CTC樹脂。

(2)按照Fmoc/tBu固相多肽合成的方法，根據FpAT序列，從C端到N端逐步偶聯Fmoc保護的氨基酸，直至完成FpAT肽樹脂的合成。

(3)使用裂解試劑將FpAT從樹脂載體上切割下來，得到粗肽。

(4)將粗肽溶解、純化及凍干得到FpAT成品。