[發(fā)明專利]一株兼具硝化功能的反硝化菌株及包含該菌株的多種活性微生物的水體改良劑及制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110428358.0
• 申請日: 2011-12-20
• 公開（公告）號: CN102492642A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發(fā)明（設計）人: 張梁;石貴陽;丁重陽;顧正華
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C12R1/125
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一株兼具硝化功能的反硝化菌株，分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)n-1，已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：M?2011443；該菌株的發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度30-40℃，通氣量1:0.3-2?vvm，攪拌速度200-1000?rpm，DO>30%；該菌株的固體菌粉制備是將發(fā)酵液經過離心或者板框過濾固液分離，再添加抗熱保護劑，進行閃蒸干燥或者噴霧干燥，得到固體菌粉，含水量2%-10%，活菌數(shù)2×10¹¹-2×10¹²?cfu/g。

2.包含CCTCC?NO：M?2011443菌株的多種活性微生物的水體改良劑，其特征在于配方中包含有：

（1）含有兼具硝化及反硝化功能的枯草芽孢桿菌CCTCC?NO：M?2011443菌株；

和（2）包含由以下兩種或兩種以上不同種類微生物：枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、沼澤紅假單胞菌、球形節(jié)桿菌、深紅酵母、植物乳桿菌；

所述水體改良劑配方中的活菌數(shù)水平為：

枯草芽孢桿菌???CCTCC?M?2011443?1×10⁷-3×10⁸?cfu

枯草芽孢桿菌?????1×10⁷-3×10⁸?cfu

地衣芽孢桿菌?????1×10⁷-3×10⁸?cfu

短小芽孢桿菌?????1×10⁷-3×10⁸?cfu

蠟狀芽孢桿菌?????1×10⁷-2×10⁹?cfu

巨大芽孢桿菌?????1×10⁷-2×10^9?cfu

沼澤紅假單胞菌?1×10⁷-1×10⁸?cfu

球形節(jié)桿菌???????1×10⁷-2×10⁸?cfu

深紅酵母???????????1×10⁷-3×10⁸?cfu???

植物乳桿菌???????1×10⁶-3×10⁸?cfu

總活菌數(shù)??????????1×10⁹-3×10¹⁰?cfu。

3.權利要求2所述水體改良劑的制備方法，其特征在于：制備步驟為：

（1）菌株的發(fā)酵培養(yǎng)：采用液體深層發(fā)酵的方式在機械攪拌式發(fā)酵罐中進行各個菌株的純培養(yǎng)，各個菌株在其特定需求溫度25-45℃下進行純培養(yǎng)達到12-48小時后，得到高濃度的純培養(yǎng)發(fā)酵菌液，菌液的單菌落活菌計數(shù)結果在1×10⁸-5×10¹⁰?cfu/mL或者cfu/g，發(fā)酵終點的pH為4.0-9.0；

（2）固體菌粉的制備：各個單菌落發(fā)酵結束后，離心去除發(fā)酵液，得到濕菌泥；其中各類芽孢桿菌，添加抗熱保護劑以后，采用噴霧干燥方法，得到各自芽孢桿菌的孢子體產品，產品活菌數(shù)達到1×10¹¹-2×10¹²?cfu/g；除芽孢桿菌以外的其它菌種，離心得到濕菌泥后，添加凍干保護劑，采用低溫真空干燥方法，得到各個菌種的活菌體產品，產品活菌數(shù)達到1×10¹⁰-2×10¹²?cfu/g；最終固體菌粉產品中，保護劑所占質量比例為30%-90%；

所述固態(tài)微生態(tài)水體改良劑的抗熱保護劑、凍干保護劑選用脫脂奶粉、半胱氨酸鹽酸鹽、乳糖、蔗糖、麥芽糊精、葡萄糖、海藻糖、山梨醇、甘露醇、麥芽糖醇、異抗壞血酸鈉、抗壞血酸鈉、谷氨酸單鈉、硫酸錳、硫酸鎂、酵母粉、大豆蛋白胨、牛肉浸粉中的一種或者幾種：

（3）固態(tài)微生態(tài)水體改良劑的制備：將按照上述固體菌粉制備方法得到的固體菌粉，按照配方中的活菌數(shù)水平稱量完成，再兌以稀釋劑，混合均勻后，即得到要求的固體水體改良劑產品；最終固體水體改良劑產品中，稀釋劑所占質量比例為90%-99%；

所述固態(tài)微生態(tài)水體改良劑涉及的稀釋劑選用葡萄糖、麩皮、米糠、豆粕粉、玉米粉、麥芽糊精、玉米粉、硅藻土、凹凸棒粉、石粉、絹云母粉、沸石粉、碳酸鈣中的一種或者幾種；

或（4）液態(tài)微生態(tài)水體改良劑的制備方法：各個單菌落的發(fā)酵液中添加常溫菌種保護劑，進行各個菌株的活菌計數(shù)，將各個菌株按照配方中的活菌數(shù)進行稱量配制，再兌以常溫菌種保護劑，得到既定濃度的液態(tài)水體改良劑；最終液態(tài)微生態(tài)水體改良劑產品中，保護劑中固體成分占總產品重量比例為1%-3%；

所述液態(tài)微生態(tài)水體改良劑涉及的常溫菌種保護劑選用甘蔗糖蜜、麥芽糊精、麩皮、豆粕粉、玉米粉、米糠粉、葡萄糖、硫酸錳、硫酸鎂、氯化鈣、硫酸銨、磷酸二氫鉀、甘露醇、山梨醇、麥芽糖醇、丙三醇、焦糖色素及水中的一種或幾種。