[發(fā)明專利]富硒谷物中硒形態(tài)的測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110428250.1
• 申請日: 2011-12-20
• 公開（公告）號: CN102520089A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱元元
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州硒谷科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 范晴

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種富硒谷物硒形態(tài)的測定方法，特別是涉及一種富硒谷物進行前處理后進行硒形態(tài)的測定方法。

背景技術(shù)

硒是人體必需的微量元素之一，是谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的組成成分，具有抗氧化、抗癌、防衰老、提高人體免疫力、保護心腦血管等作用(Rotruck?J?T，Pope?A?L，Ganther?H?E，et?al?Selenium：biochemical?role?as?a?component?of?glutathione?peroxidase.Science，1973，179，588-590.)。我國有2/3的地區(qū)缺硒，其中有1/3的地區(qū)為嚴重缺硒地區(qū)。人和動物體缺硒會導致克山病，大骨節(jié)病，動物的白肌病等，除此以外一些癌癥，地方性甲狀腺障礙等疾病也與低硒環(huán)境密切相關(guān)(Ip?C.Lessons?from?basic?research?in?selenium?and?cancer?prevention.Journal?Nutrition，1998，128，1845-1854.)。人們?nèi)粘ｏ嬍持械奈o機硒和有機硒，其中無機硒毒性較大，中毒量與需要量的界限非常接近，而且吸收和利用率差，生物有效性低，因而被嚴格限制其使用量。有機硒更利于人體吸收利用，生物活性強，毒性低(盧嵐，魯兵，王春娥.保健食品中有機硒和無機硒的分析探討.中國衛(wèi)生檢驗雜志.2010，20(4)：767-769.)，是更高效、安全的人體補硒形式。硒的生物學功能的發(fā)揮主要依賴于其存在形態(tài)，特別是有機硒(硒代氨基酸)的形態(tài)。因此，準確的檢測分析硒代氨基酸的形態(tài)具有重大的意義，不僅能指導消費者科學補硒，還能進一步了解硒的生物化學特性和硒在自然界遷移變化的規(guī)律。

目前，我國測定有機硒含量的方法主要為差減法(秦昉.植物中有機硒含量的測定.無錫輕工業(yè)大學學報.1998，17(4)：74-77.)，差減法的原理是先利用不同的試劑將待測樣品中的有機硒和無機硒分離，因無機硒主要以硒酸根(SeO42-)和亞硒酸根(SeO32-)陰離子形式存在，易溶于水。有機硒主要是與蛋白質(zhì)、纖維素和碳水化合物中的C、N等結(jié)合，以大分子的有機物形態(tài)存在，所以可利用環(huán)己烷或甲苯等有機溶劑萃取出有機硒，再通過測定總硒和無機硒的含量，差減得到有機硒的含量。此方法操作步驟繁瑣，重復(fù)性差，只能得到有機硒的總量，對于具體的有機硒形態(tài)并不清楚，且所用的環(huán)己烷、甲苯等有機溶劑存在一定的毒性。硒形態(tài)研究屬于前沿研究，目前國內(nèi)、外并無硒形態(tài)研究方法的標準。本發(fā)明利用溫和的提取方式，提取含硒化合物，利用酶水解含硒化合物后再利用液相色譜進行有效分離，最后利用高靈敏度的原子熒光(AFS)進行不同形態(tài)硒的測定，最后得到有機硒的含量。此方法的優(yōu)點是能測定富硒植物中不同形態(tài)的硒含量和有機硒含量，能進一步了解植物富集吸收硒的轉(zhuǎn)化規(guī)律，此方法簡單易操作，重復(fù)性好，精確度高，所用試劑無毒、無污染。

國外對硒形態(tài)測定的前處理方法也有報道，Selenium?species?in?leaves?of?chicory，dandelion，lamb’s?lettuce?and?parsley(Darja?Mazej，Vekoslava?Stibilj，et?al.Food?Chemistry，2008，107：75-83.)公開了一種單獨利用蛋白酶水解樣品然后進行硒形態(tài)測試的方法，該方法蛋白酶用量與樣品的比例為1∶2～1∶5，成本很高。

所以，開發(fā)一種針對以硒代氨基酸為主要分析目標、低成本高效率的樣品前處理及測試方法十分有必要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有硒形態(tài)測定技術(shù)特別是提取技術(shù)中存在的不足，提供一種操作簡便，提取效率高，重復(fù)性好，成本低的富硒谷物中硒形態(tài)的測定方法。

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：

一種富硒谷物中硒形態(tài)的測定方法，其特征在于所述方法包括以下步驟：

(1)富硒谷物的預(yù)處理：使用提取緩沖液Tris-HCl對粉碎處理后的富硒谷物樣品進行提取，提取處理后先加入有效量的淀粉酶進行水解，然后依次加入有效量的蛋白酶K、蛋白酶XIV進行水解提取得到待測樣品溶液；