[發(fā)明專利]包括1081C＞A突變的CYP2C9基因片段、所編碼的蛋白質(zhì)片段及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110427392.6
• 申請(qǐng)日: 2011-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN103045617A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡劍平;戴大鵬;徐仁愛;胡國新;楊麗萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蔡劍平
• 主分類號(hào): C12N15/53
• 分類號(hào): C12N15/53;C12N15/11;C12N9/02;C12Q1/68
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標(biāo)代理有限公司 11012
• 代理人: 王昭林

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物學(xué)領(lǐng)域，涉及單堿基突變。更具體地，本發(fā)明涉及CYP2C9基因相對(duì)于SEQ?ID?NO.1的第1001位或SEQ?ID?NO.2的第1081位的突變位點(diǎn)，包含該突變位點(diǎn)的核酸片段及其相應(yīng)編碼的蛋白質(zhì)片段。本發(fā)明還涉及鑒定所述突變位點(diǎn)的試劑和檢測(cè)方法，以及鑒定該位點(diǎn)在指導(dǎo)用藥中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

CYP2C9是細(xì)胞色素P450酶大家族CYP2C亞家族中最重要的一員，約占人肝微粒體CYP酶總量的20％。有大約10～16％臨床常用藥物經(jīng)由CYP2C9氧化代謝，其中主要包括甲苯磺丁脲、S-華法林、苯妥英、格列吡嗪、格列苯脲、托拉噻咪、氯沙坦、厄貝沙坦和許多非甾體類抗炎藥物(如：布洛芬、氯諾昔康、雙氯芬酸和萘普生)等藥物(參見參考文獻(xiàn)1-5)。

CYP2C9基因具有高度多態(tài)性。目前為止，國際上已命名的等位基因共有35種(http://www.cypalleles.ki.se)，除去野生型(CYP2C9*1)外，共有34種突變類型可引起CYP2C9蛋白氨基酸組成發(fā)生改變，另外還有多種新發(fā)現(xiàn)的突變尚未被命名。研究較多且臨床意義較大的突變類型主要包括以下10種：CYP2C9*2、*3、*5、*6、*8、*11、*12、*13、*14、*16，其中人種分布最廣、研究最多、中國人群研究資料相對(duì)最豐富的突變型是CYP2C9*2(430C＞T)、CYP2C9*3(1075A＞C)(參見參考文獻(xiàn)6-17、20)。

根據(jù)目前的臨床研究顯示，CYP2C9基因的這種多態(tài)性是造成CYP2C9酶活性在個(gè)體之間極大不同的主要原因，因此在攜帶不同CYP2C9基因型的個(gè)體間可引起藥物療效的極大差異，甚至產(chǎn)生嚴(yán)重的藥物毒副作用或治療不充分。因此，研究CYP2C9基因多態(tài)性對(duì)藥物療效的影響將對(duì)臨床合理用藥提供重要的科學(xué)依據(jù)(參見參考文獻(xiàn)18、19、21、22)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供CYP2C9基因的新的單堿基突變位點(diǎn)，包含該突變位點(diǎn)的核酸片段、其編碼的蛋白質(zhì)片段及鑒定該突變位點(diǎn)在用藥指導(dǎo)中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供核酸片段，所述核酸片段包含對(duì)應(yīng)于SEQ?IDNO.1的第1001位的突變位點(diǎn)，且是SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列中的至少10個(gè)連續(xù)核苷酸，其中第1001位的核苷酸是A；或者所述核酸片段包含對(duì)應(yīng)于SEQ?ID?NO.2的第1081位的突變位點(diǎn)，且是SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列中的至少10個(gè)連續(xù)核苷酸，其中第1081位的核苷酸是A；或者為上述核酸片段的互補(bǔ)序列。

本發(fā)明的第二個(gè)方面是提供與含有對(duì)應(yīng)于SEQ?ID?NO.1的第1001位或?qū)?yīng)于SEQ?ID?NO.2的第1081位的突變位點(diǎn)的等位基因片段或其互補(bǔ)序列全部或部分雜交的等位基因特異性寡核苷酸，其中SEQ?ID?NO.1的第1001位或SEQ?ID?NO.2的第1081位的突變位點(diǎn)的核苷酸是A；所述等位基因片段是SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列中的至少10個(gè)連續(xù)核苷酸或其互補(bǔ)序列。

本發(fā)明的第三個(gè)方面是提供用于檢測(cè)和/或分析單堿基突變的試劑盒，所述試劑盒包含本發(fā)明的核酸片段或等位基因特異性寡核苷酸，或包含SEQ?IDNO.12和/或SEQ?ID?NO.13和/或SEQ?ID?NO.21所示的序列片段。

本發(fā)明的第四個(gè)方面是提供本發(fā)明的核酸片段或寡核苷酸在檢測(cè)CYP2C9基因突變中的應(yīng)用，其中所述核酸片段或寡核苷酸用作探針或引物。

本發(fā)明的第五個(gè)方面是提供一種用藥指導(dǎo)，包括檢測(cè)待測(cè)樣品中CYP2C9基因的對(duì)應(yīng)于SEQ?ID?NO.1的第1001位或SEQ?ID?NO.2的第1081位的單堿基突變；根據(jù)檢測(cè)到的突變，調(diào)整由CYP2C9代謝的藥物的給藥量。

本發(fā)明的第六個(gè)方面是提供分析核酸的方法，所述方法包括分析待測(cè)樣品中的包含對(duì)應(yīng)于SEQ?ID?NO.1的序列的核酸中對(duì)應(yīng)于第1001位的核苷酸或分析待測(cè)樣品中的包含對(duì)應(yīng)于SEQ?ID?NO.2的序列的核酸中對(duì)應(yīng)于第1081位的核苷酸。

本發(fā)明的第七個(gè)方面是提供CYP2C9蛋白或其片段或變異體，所述蛋白序列為SEQ?ID?NO.3所示的序列；所述片段或變異體包含對(duì)應(yīng)于SEQ?ID?NO.3的第361位的異亮氨酸，并且為SEQ?ID?NO.3所示的氨基酸序列的至少10個(gè)連續(xù)氨基酸。