[發明專利]預知子活性組分的制備方法及其制劑的制備方法與其在制備抗腫瘤藥物中的應用

有效

• 申請號: 201110425710.5
• 申請日: 2011-12-19
• 公開（公告）號: CN103156891A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 楊世林;馮育林;許瓊明;陳蘭英;李俊;劉艷麗;李志峰;張武崗
• 申請（專利權）人: 江西本草天工科技有限責任公司
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61P35/00;A61K131/00
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種預知子活性組分的制備方法及其制劑的制備方法與其在制備抗腫瘤藥物中的應用，該活性組分具有顯著的抗腫瘤活性，可以用來制備抗腫瘤藥物或腫瘤輔助治療藥物。?

背景技術

預知子為木通科植物木通[Akebia?quinata(Thunb.)?Decne.]、三葉木通[Akebia?trifoliate(Thunb.)?Koidz.]或白木通[Akebia?trifoliate?(Thunb.)Koidz.?var.?australis?(Diels)?Rehd.]的干燥近成熟果實。味苦，寒。歸肝、膽、胃、膀胱經。用于舒肝理氣、活血止痛、利尿、散結。用于脘脅脹痛、經閉痛經、小便不利、痰核痞塊。文獻報道：皂苷類成分是預知子中的主要成分，具有保肝、止痙、止痛、抗真菌、殺蟲等多種藥理活性，這些作用與預知子的臨床療效具有相關性。另外經過反復研究，預知子中的某幾類皂苷具有抗腫瘤的活性，經過系統研究，準備開發以該活性組分為主要成分的抗腫瘤藥物。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種預知子提取物，本發明另一個目的在于提供一種預知子提取物的制備方法及該提取物在抗腫瘤領域的應用。?

本發明所述的預知子活性成分是通過如下技術方案實現的：?

取預知子藥材，將其粉碎成粗粉，用5-95%乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加熱回流提取1-3次，每次1-3h，過濾，合并濾液；上述濾液于50-70℃減壓濃縮至0.2-1.0g生藥材/mL，靜止，離心，得沉淀Ⅰ和上清液Ⅰ；上清液Ⅰ用氫氧化鈉調PH至8-14，60-100℃水解2-8個小時，水解后加鹽酸調PH至3-7，離心，得沉淀Ⅱ和水解后上清液Ⅱ；合并沉淀Ⅰ，沉淀Ⅱ，干燥，即得預知子活性組分。

經過本工藝提取純化可將預知子抗腫瘤活性組分中皂苷類成分含量大于50%；經HPLC法測定沉淀Ⅰ中的主要皂苷為三萜皂苷（3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷、saponins?B、saponins?P_D和saponins?A）的量占了預知子中總皂苷量的90%以上，具抗腫瘤活性，而上清液Ⅰ抗腫瘤活性不明顯，但經堿水解后，獲得沉淀Ⅱ，通過HPLC法測定其主要成分與沉淀Ⅰ相同，且有抗腫瘤活性。?

在最初的制備工藝中，將上清液Ⅱ經大孔吸附樹脂柱吸附，上樣后依次用水、40%乙醇70-90%乙醇洗脫，收集70-90%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得提取物Ⅲ。研究發現，沉淀Ⅰ、沉淀Ⅱ及提取物Ⅲ的組分基本相同（主要含有3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷、saponins?B、saponins?P_D和saponins?A），且三部分組分中總皂苷的含量均大于50%。然而，沉淀Ⅰ的得率為2-8%，沉淀Ⅱ的得率為2-5%，提取物Ⅲ的得率為0.1-0.3%，從節約資源和經濟效益方面考慮，大孔樹脂這部分可以不做考慮，實際中合并沉淀Ⅰ和沉淀Ⅱ；即得預知子活性組分。本發明中沉淀Ⅰ和沉淀Ⅱ，單獨使用或合并使用（優選合并使用）都可以用于制備抗腫瘤或用于腫瘤輔助治療的藥物，該活性組分可以作為活性成分與藥物載體配制成藥劑學上的各種制劑，預知子抗腫瘤活性組分在制劑中的分散狀態可以是液體，也可以是固體，該制劑的給藥途徑可以是口服、注射和局部給藥。?

本發明中用紫外/可見分光光度法測定皂苷類成分含量：

1、齊墩果酸對照品溶液的制備

精密稱取齊墩果酸對照品5mg，轉移至50mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容，配成0.1mg/mL的標準品溶液，冷藏保存備用。

2、齊墩果酸最大吸收波長的確定?

精密吸取對照品溶液和待測樣品溶液1ml，各2份（一份做空白，一份做顯色），加入已標號的干燥的具塞試管中，于60℃真空干燥箱中揮干，空白組加入5ml的甲醇，顯色組加入5ml的高氯酸，搖勻，顯色組于70℃水浴中反應15min，并時時振搖，反應完全后立即置冰水浴中冷卻15min，隨行試劑為空白，于島津UV-2550紫外分光光度計，在200～700nm波長范圍內進行掃描。結果供試品溶液與對照品溶液在310nm波長處有最大吸收，故確定測定波長為310nm。

3、標準曲線的繪制?