[發明專利]一種抗腫瘤生物制品及其制備方法

無效

• 申請號: 201110420122.2
• 申請日: 2011-12-15
• 公開（公告）號: CN102488891A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 趙鋼;王國新;王智佳;張偉
• 申請（專利權）人: 天津濟命生生物科技有限公司
• 主分類號: A61K38/19
• 分類號: A61K38/19;A61K38/20;A61K35/28;A61P35/00;A61K35/14
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技術領域

本發明是涉及生物技術領域，尤其是一種抗腫瘤生物制品及其制備方法。

背景技術

白細胞介素-2(即白細胞介素-2)是80年代國際上開始研制的生物制品。它是繼傳統治療腫瘤的三大療法(手術、化學、放射療法)之后的第四種療法即生物療法(BRM)的關鍵藥物。其本身大大劑量可有抗癌活性；用白細胞介素-2在人體外培養人的淋巴細胞，使淋巴細胞具有殺傷腫瘤細胞，而不損傷正常細胞，其殺傷腫瘤細胞能力大為增強的特性，并使淋巴細胞的數量得到大量、快速的增殖(此種經白細胞介素-2激活的淋巴細胞稱之為LAK細胞)。美國癌研究中心Rosenberg.SA用LAK細胞加白細胞介素-2治療晚期惡性腫瘤，獲得8例腫瘤完全消失的顯著效果。但是目前所使用的白細胞介素-2是來自人體的淋巴細胞、人的扁桃腺、人的脾，這些都是從車禍等死者身上及時采取或從活人身上采取，誘導培養白細胞介素-2(而不用白細胞介素1-7等)，提取工藝復雜，設備昂貴，藥物來源困難，所以價格極高。也有采用基因工程方法，將人的白細胞介素-2基因摻入大腸桿菌中，生產的白細胞介素-2稱之為重組白細胞介素-2(即白細胞介素-2)，其價格也未降下來多少，用Rosenberg.SA的劑量，一人一療程，需1000萬元人民幣，且含有大腸桿菌毒素無法完全消除，人體使用發高燒，有毒素放應。

因此，研發一種使用安全，價格低廉、藥源廣泛的細胞因子是現階段亟待解決的技術問題。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種抗腫瘤生物制品及其制備方法。

為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：

一種抗腫瘤生物制品及其制備方法，是由下述方法得到的：

取新鮮豬血無菌操作制成細胞懸液，加入雞新城疫病毒或仙臺病毒于RPMI1640的培養基中、誘導培養72～96小時，收獲上清液，上清液在超濾器中經300Kd超濾膜超濾，取300Kd超濾膜的膜以下部分，再在超濾器中經5Kd超濾膜超濾，取5Kd超濾膜的膜以上部分，除菌后即為白細胞介素為主的復合細胞因子。

上述用于一種抗腫瘤生物制品及其制備方法，具體步驟如下：

取新鮮豬脾無菌操作制成細胞懸液，加入雞新城疫病毒或仙臺病毒于RPMI1640的培養基中、誘導培養72～96小時，收獲上清液，上清液在超濾器中經300Kd超濾膜超濾，取300Kd超濾膜的膜以下部分，再在超濾器中經5Kd超濾膜超濾，取5Kd超濾膜的膜以上部分，除菌后即為白細胞介素為主的復合細胞因子。

上述用于一種抗腫瘤生物制品及其制備方法，具體步驟如下：

(1)取新鮮豬脾放入慶大霉素溶液中浸泡2小時，用研磨器將脾研碎制成細胞懸液；

(2)按體積比1∶5加入生理鹽水稀釋，將稀釋后細胞懸液經200目細胞篩過濾，將濾液倒入離心管中，1500轉/分離心30分鐘，計數細胞數量，按6×10⁶濃度加入到RPM1640培養基中，按4000單位/ml加入慶大霉素，再加入雞新城疫病毒(NDV)或仙臺病毒各10ml于培養瓶中培養；

(3)于37℃，5～7％CO₂培養箱中培養48小時，取培養上清液，4000轉/分離心30分鐘，棄沉渣，取上清，收獲上清液；

(4)取步驟(3)所得上清液在超濾器中經300Kd超濾膜超濾，取超濾膜下部分，再在超濾器中經5Kd超濾膜超濾，取超濾膜上部分，即為細胞因子。

上述用于一種抗腫瘤生物制品及其制備方法，具體步驟如下：

(1)取新鮮豬血1500轉/分離心30分鐘，取白細胞懸液加入RPM1640培養基，調節細胞濃度為6×10⁶濃度，再加入雞新城疫病毒或仙臺病毒各10ml于培養瓶中培養；

(2)于37℃，5～7％CO₂培養箱中培養48小時，取培養上清液，4000轉/分，離心30分鐘，棄沉渣，取上清，收獲上清液；

(3)取步驟(2)所得上清液在超濾器中經300Kd超濾膜超濾，取超濾膜下部分，再在超濾器中經5Kd超濾膜超濾，取超濾膜上部分，即為細胞因子。

本發明的有益效果是：