[發明專利]一種大蔥組織培養中的種子消毒方法

無效

• 申請號: 201110417712.X
• 申請日: 2011-12-14
• 公開（公告）號: CN103155863A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 步懷宇
• 申請（專利權）人: 西安瑞捷生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安西達專利代理有限責任公司 61202
• 代理人: 李文義

技術領域

本發明屬于組織培養領域，具體涉及一種大蔥組織培養中的種子消毒方法。

背景技術

大蔥（Allium?fistulosum?L.）為百合科蔥屬二年生草本植物，富含鈣、磷、維生素，不僅味道鮮美，而且具有醫療保健功效。據FAO統計，2009年我國栽培大蔥面積達26560公頃，居世界第一位。

近年來，隨著分子生物技術的迅速發展和基因工程的日趨普及，利用轉基因植株生產藥物、疫苗和生物制劑愈加展示出廣闊的應用前景和潛在的經濟效益。在轉基因植株的研究中，無菌苗的篩選和培育是試驗成功的關鍵，而無菌苗一般由種子獲得，因此，種子有效消毒顯得尤為重要。

迄今，各種滅菌方法報道頗多（楊嵐?等，2008；John?H?et?al.,1985;?R.L.M.Pierik,1987;?Trevor?A?,1981;?吳良歡?等，1997，1999），但是有關大蔥種子消毒的方法鮮有報道。

發明內容

針對上述現有技術的不足，本發明提供了一種大蔥組織培養中種子消毒的有效方法。

本發明是通過以下技術方案來實現的：

一種大蔥組織培養中的種子消毒方法，其特征在于：消毒液采用2%的次氯酸鈉溶液，在消毒過程中添加吐溫-20。

本方法包括如下步驟：

1）將大蔥種子用自來水沖洗，用自來水沖洗時在三角瓶中加入吐溫-20；

2）置于超凈工作臺上用75%酒精漂洗；

3）用2%的次氯酸鈉消毒；

4）用加入吐溫-20的無菌水沖洗3-5遍，最后用無菌水沖洗1遍完成消毒步驟。

步驟（1）中自來水沖洗時間為20～40min，優選為30?min。

步驟（1）中吐溫-20的加入量為1-2滴。

步驟（2）中酒精漂洗時間為0.5～1min。

步驟（3）中用2%的次氯酸鈉消毒的時間為30min～50?min，優選為40?min。

步驟（4）中無菌水中按10000:1的比例添加吐溫-20，所述比例為質量比。

本發明所述方法與現有的大蔥組織培養中的種子消毒方法相比，具有發芽率高、污染率小的優點，并保證了較高的成苗率。

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具體實施方式

下面結合實施例對本發明進一步的說明，但本發明并不局限于此。本實施例均以山東省農業科學院蔬菜研究所提供的章丘大蔥品種種子為試驗材料。

應用實施例一

本實施例采用六種常用消毒方法對大蔥種子進行消毒處理，并進行了添加吐溫-20對大蔥種子消毒效果的影響研究，通過調查大蔥種子始發期、發芽率、發芽勢、污染率等項目。?

種子消毒處理方法：每個處理200粒種子，先將大蔥種子用自來水沖洗30min，然后置于超凈工作臺上用75%酒精漂洗0.5～1min，轉入消毒液中進行消毒處理，最后用無菌水沖洗3-5遍，消毒處理后接種于MS培養基。

種子消毒處理設計：①2%的次氯酸鈉中消毒20min；②2%的次氯酸鈉中消毒40min；③2%的次氯酸鈉中消毒60min。④0.1%的升汞中消毒5min；⑤0.1%的升汞中消毒10min；⑥0.1%的升汞中消毒15min。

大蔥種子消毒處理添加吐溫-20試驗?

處理方法：每個處理100粒種子，先將大蔥種子用自來水沖洗30min，然后置于超凈工作臺上用75%酒精漂洗0.5～1min，轉入2%次氯酸鈉消毒40min，消毒后接種于MS培養基。

處理設計：①大蔥種子消毒前，用自來水沖洗時在三角瓶中加入1-2滴吐溫-20；②大蔥種子消毒后，用加入吐溫-20的無菌水（無菌水中按10000:1的比例添加吐溫-20），沖洗3-5遍，最后用無菌水沖洗1遍；③處理1與處理2同時進行；④對照（CK）：正常消毒，不加吐溫-20。

大蔥無菌苗培養

將消毒處理后的種子，接種于MS培養基（經高壓滅菌）培養，培養基中添加蔗糖3%，瓊脂0.9%，pH5.8-6.0。培養溫度25±1℃，光照強度3000Lx，光照時間每天16h。

培養10天時調查統計發芽勢；培養30天時調查統計發芽率、污染率；第一粒種子發芽的時間為種子發芽始期。數據處理采用SPSS軟件。

結果與分析如下：

1）消毒方法對大蔥種子發芽及消毒效果的影響

表1?不同消毒方法的效果比較