[發明專利]一種布魯氏菌B細胞表位及其單克隆抗體和應用無效

申請號：	201110417613.1	申請日：	2011-12-14
公開（公告）號：	CN102532271A	公開（公告）日：	2012-07-04
發明（設計）人：	王文敬;丘金浪;吳靜波;黎誠耀	申請（專利權）人：	南方醫科大學
主分類號：	C07K7/08	分類號：	C07K7/08;C07K16/12;G01N33/569;G01N33/577;A61K39/10;A61K39/40;A61P31/04
代理公司：	廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205	代理人：	譚英強
地址：	510515 廣東***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種布魯氏菌細胞及其單克隆抗體應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種布魯氏菌B細胞表位，以及使用該表位刺激得到的抗布魯氏菌bp26蛋白單克隆抗體。本發明還涉及該細胞表位抗體及該細胞表位的應用。

背景技術

布魯氏菌病（Brucellosis）是目前世界上流行最廣的人畜共患傳染病之一，近十幾年來，該病的發生和流行在世界范圍內呈上升趨勢。據世界衛生組織統計表明，全世界每年出現50萬例人布魯氏菌病，每年造成的經濟損失達30億美元?，我國布病的流行以羊種布氏桿菌為主的混合感染，羊種占流行株的80%。

布魯氏菌病目前缺乏特異有效的治療手段，大劑量抗菌素即使長期治療收效仍有限，尤其難以克服菌株耐藥問題，疫苗接種和清除感染宿主是防控的主要手段。布魯氏菌病的免疫制劑種類繁多，主要包括弱毒活疫苗﹑死疫苗﹑亞單位疫苗﹑抗獨特性疫苗和DNA疫苗等。

由于熱滅活菌缺乏活性抗原刺激，不能在體內誘發可檢測的IL-12，并且抑制IL-12的產生，免疫效果不佳，而且死菌誘發的多是無保護力的體液免疫應答。而亞單位疫苗雖然可起到短期的保護作用，但并不能誘發有效的長期免疫，只有活菌才能誘發細胞免疫。

我國主要是以弱毒菌苗株M5-90來免疫羊。它對成年羊有很好的免疫保護效果，但會導致妊娠羊流產。bp26蛋白與弱毒菌苗株毒力相關，并含有保護性抗原表位，若將M5-90疫苗株攜帶的bp26基因全部敲除，則影響弱毒菌苗株的免疫效果。另外，由于M5-90免疫的動物和野毒菌株自然感染的動物現有診斷方法不能鑒別，嚴重影響了布魯氏菌病的檢驗和疫苗免疫預防。因此，針對bp26蛋白的抗原表位進行修飾或改造標記疫苗，可建立該表位多肽ELISA診斷方法及其診斷試劑，進而解決布魯氏菌病鑒別診斷和基因工程標記弱毒菌苗株的技術難題。

關于bp26蛋白的表位研究，Patricia?Seco-Mediavilla?等人構建了系列的截短多肽的表達質粒，并表達純化融合蛋白對抗bp26單克隆抗體進行表位篩選，但是篩選出來的抗原表位段并不明確。(參見Epitope?Mapping?of?the?Brucella?melitensis?BP26?Immunogenic?Protein:?Usefulness?for?Diagnosis?of?Sheep?Brucellosis?，?Seco-Mediavilla，?Verger?et?al.?Clin.?Vaccine.?Immunol.?2003，?10(4):647)。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種布魯氏菌B細胞表位。

本發明的另一個目的在于提供上述B細胞表位在制備診斷、預防或治療布魯氏菌病診斷試劑或藥物中的應用。

本發明的又一個目的在于提供由上述細胞表位刺激產生的單克隆抗體。

本發明的再一個目的在于提供上述單克隆抗體在制備診斷、預防或治療布魯氏菌病診斷試劑或藥物中的應用。

本發明所采取的技術方案是：

布魯氏菌B細胞表位，其序列為DRDLQTGGI(?SEQ?ID?NO：1)。

抗布魯氏菌bp26蛋白的單克隆抗體，其制備方法為：

1)??將上述的布魯氏菌B細胞表位免疫動物；

2)??取經免疫的動物脾細胞與瘤細胞融合，得到可穩定分泌抗布魯氏菌bp26蛋白的雜交瘤細胞；

3)??收集、純化雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體，即為抗布魯氏菌bp26蛋白的單克隆抗體。

優選的，產生免疫反應的動物的血清間接ELISA效價不低于1：51200。