[發明專利]一種光滑假絲酵母菌PCR檢測試劑盒及檢測方法有效
| 申請號： | 201110415764.3 | 申請日： | 2011-12-13 |
| 公開（公告）號： | CN102409106A | 公開（公告）日： | 2012-04-11 |
| 發明（設計）人： | 何華東;黃發平 | 申請（專利權）人： | 泰普生物科學（中國）有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/72 |
| 代理公司： | 福州市鼓樓區博深專利代理事務所(普通合伙) 35214 | 代理人： | 林志崢 |
| 地址： | 350002 福建省福州市金*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 光滑 酵母菌 pcr 檢測 試劑盒 方法 | ||
1.一種光滑假絲酵母菌PCR檢測試劑盒，包括PCR反應液，其特征在于，所述PCR反應液包括引物和熒光探針，所述引物分為上游引物A和下游引物A；
所述上游引物A的核苷酸序列為：
5’-ACCAGTCCCACCACCACCTGTTC-3’；
所述下游引物A的核苷酸序列為：
5’-CTTCCACAGCGTGATGAGGAGCA-3’；
所述熒光探針A的核苷酸序列為：
5’-FAM-TCAATTTCCTTCAACGAATCCCAAAGAGG-BHQ-3’。
2.按權利要求1所述的光滑假絲酵母菌PCR檢測試劑盒，其特征在于，還包括DNA提取液，dNTPs、tap酶、UNG酶、陽性對照、陰性對照。
3.按權利要求2所述的光滑假絲酵母菌PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP、dUTP。
4.按權利要求2所述的光滑假絲酵母菌PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述DNA提取液包括：聚乙二醇辛基苯基醚、乙基苯基聚乙二醇、正辛酸，所述聚乙二醇辛基苯基醚的質量百分數為2％，所述乙基苯基聚乙二醇的質量百分數為1％，所述正辛酸的摩爾濃度為0.04M。
5.按權利要求1所述的光滑假絲酵母菌PCR檢測試劑盒，其特征在于，還包括提取固形物，所述提取固形物為直徑0.5mm和1.0mm兩種玻璃珠，按質量配比9∶1比例配制出。
6.按權利要求1所述的光滑假絲酵母菌PCR檢測試劑盒，其特征在于，引入了一個人工構建的neo內參照系統用于避免檢測結果假陰性，所述內參照系統的引物、探針序列組合如下：
上游引物B：5’-GACTAAACTGGCTGACGG-3’；
下游引物B：5’-GTATTTCGTCTCGCTCAG-3’；
熒光探針B：5’-TEXrd-ATGCCTCTTCCGA-BHQ-3’。
7.按權利要求1所述的光滑假絲酵母菌PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述熒光探針的5’端標記FAM熒光基團，3’端標記BHQ淬滅基團。
8.一種光滑假絲酵母菌PCR檢測方法，其特征在于，其中PCR擴增的靶序列如SEQ?ID?NO.7，PCR擴增所用引物為：上游引物A序列如：SEQ?ID?NO.1，下游引物A序列如：SEQ?ID?NO.2，熒光探針A序列如：SEQ?ID?NO.3。
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