[發明專利]一種制備固定化腈水解酶的方法

無效

• 申請號: 201110414276.0
• 申請日: 2011-12-13
• 公開（公告）號: CN102517274A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 周小華;張杰;康宏寬;王丹;徐溢;王穎利
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: C12N11/08
• 分類號: C12N11/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備固定化腈水解酶的方法，其特征在于所述方法的具體步驟如下：

(1)腈水解酶的預處理

以市售腈水解酶為原料，按照市售腈水解酶的質量∶緩沖溶液的體積比為1g∶8～10mL的比例，將市售腈水解酶加入到緩沖溶液中，攪拌溶解30～40分鐘后再泵入抽濾機中，進行抽濾，分別收集抽濾液和抽濾渣，其中，所述的緩沖溶液為pH值為8～11的pH?8.0的硼砂-氯化鈣緩沖溶液或pH?9.0的硼砂-氯化鉀緩沖溶液或pH?10.8的硼砂-碳酸鈣緩沖溶液；

(2)制備固定化腈水解酶粗品

第(1)步完成后，按照市售賴氨酸-大孔離子交換樹脂載體的質量∶第(1)步的收集抽濾液的體積∶戊二醛質量濃度為25％的戊二醛溶液的體積比為1g∶2～3mL∶0.5～0.8mL的比例，先將賴氨酸-大孔離子交換樹脂載體加入緩沖溶液中，浸泡2～3小時，再加入第(1)步收集抽濾液和戊二醛溶液，攪拌均勻后，升溫至30～45℃，恒溫反應6～7小時，進行固定化酶反應，反應完成后通過抽濾機進行抽濾，分別收集抽濾渣和抽濾液，其中，所述的緩沖溶液為pH值為8～11的pH?8.0的硼砂-氯化鈣緩沖溶液或pH?9.0的硼砂-氯化鉀緩沖溶液或pH?10.8的硼砂-碳酸鈣緩沖溶液；

(3)制備固定化腈水解酶

第(2)步完成后，將第(2)步收集的抽濾渣，按照抽濾渣的質量∶蒸餾水的體積之比為1g∶4～5mL的比例，用蒸餾水對抽濾渣進行洗滌，分別收集洗滌渣和洗滌液，對于收集的洗滌渣，即為制備出的固定化腈水解酶，放置于4～6℃下保存；

(4)再生處理

第(3)步完成后，將第(2)步收集的抽濾液，泵入截留分子量為1000～5000Da的納濾器中，在壓力為0.1～0.4MPa的條件下，進行納濾，直至納濾截留液體積減少至原體積的10～30％時止，分別收集納濾濾過液和納濾截留液。