[發(fā)明專(zhuān)利]食品及飼料中火雞成分的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110403973.6
• 申請(qǐng)日: 2011-12-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102433382A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張舒亞;褚慶華;韓麗;蔣靜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 上海專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和核酸檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及食品或飼料中火雞成分的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法和試劑盒。

背景技術(shù)

為確保食品成分的真實(shí)性，質(zhì)檢“十二五”規(guī)劃綱要明確指出“十二五”期間需重點(diǎn)加強(qiáng)開(kāi)展食品摻假鑒別技術(shù)研究?！吨腥A人民共和國(guó)產(chǎn)品質(zhì)量法》、《中華人民共和國(guó)食品衛(wèi)生法》和《食品標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》(國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局令第102號(hào))等法律法規(guī)禁止產(chǎn)品的造假摻假行為和正確標(biāo)識(shí)食品標(biāo)簽。然而，由于經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)動(dòng)，一些不法商在食品的加工過(guò)程中，常常以?xún)r(jià)格低廉的原料替代或摻入高價(jià)格的原料，或者根本就不添加標(biāo)注的原料成分。在加工產(chǎn)品的造假摻假過(guò)程中，經(jīng)常會(huì)使用有毒有害物質(zhì)(如染色饅頭等)，危害人民身體健康。

在動(dòng)物產(chǎn)品原料和加工產(chǎn)品中，經(jīng)常出現(xiàn)成分的摻假造假和無(wú)意污染現(xiàn)象。人為攙假主要是不法商要降低成本或增加品質(zhì)，以謀取巨額的經(jīng)濟(jì)利益。這種摻假造假、以次充好的行為除了影響我國(guó)經(jīng)濟(jì)，另一個(gè)最主要的是影響人體健康和畜禽安全。瘋牛病和禽流感的世界性爆發(fā)和流行，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注食品安全和飼料安全。部分人群因?yàn)榻】稻壒室仓皇秤盟厥巢糠帧／偱２〉陌l(fā)生是由于反芻動(dòng)物食用了含有動(dòng)物成分的飼料，所以各國(guó)禁止含有動(dòng)物成分的飼料喂養(yǎng)動(dòng)物。含有禽成分的飼料可能具有傳播禽流感的風(fēng)險(xiǎn)。用這些摻假的飼料喂養(yǎng)動(dòng)物，會(huì)影響畜禽的健康生長(zhǎng)及我們的畜牧業(yè)安全。

本方法是采用實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法對(duì)火雞成分進(jìn)行鑒定。該方法的推廣應(yīng)用對(duì)保障產(chǎn)品的質(zhì)量，保護(hù)消費(fèi)者知情權(quán)和選擇權(quán)，維護(hù)正常的經(jīng)濟(jì)秩序等提供技術(shù)支持。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供食品或飼料中火雞成分的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法。

本發(fā)明的另一目的在于提供食品或飼料中火雞成分的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒.

在本發(fā)明的第一方面，提供一種鑒定火雞成分的方法，所述方法包括：

以待測(cè)樣品的DNA為模板，以SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；若發(fā)生特異性擴(kuò)增，則表明待測(cè)樣品中包含火雞成分。

在一個(gè)優(yōu)選例中，在以SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的引物以及SEQ?ID?NO：3所示的Taqman?MGB探針進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)。

在另一優(yōu)選例中，所述的待測(cè)樣品是食品或飼料。

在另一優(yōu)選例中，所述方法的檢測(cè)靈敏度為10^-4ng/μL?DNA。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種引物，所述引物是引物對(duì)，其序列如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種Taqman?MGB探針，述的探針序列如SEQ?ID?NO：3所示。

在本發(fā)明的另一方面，提供所述的引物或所述的Taqman?MGB探針的用途，用于從待測(cè)樣品中鑒定火雞成分。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種鑒定火雞成分的試劑盒，其中包括所述的引物；和/或所述的Taqman?MGB探針。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括：含有火雞成分的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品(該標(biāo)準(zhǔn)品中火雞成分含量是確定的)。

在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括選自以下的試劑：DNA提取試劑(或試劑盒)，Taq酶，PCR緩沖液，DNA聚合酶，和/或說(shuō)明鑒定火雞成分的方法的使用說(shuō)明書(shū)。

本發(fā)明的其它方面由于本文的公開(kāi)內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。

附圖說(shuō)明

圖1、火雞源性引物探針特異性實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)圖譜。僅在火雞DNA中產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物，而在其它物種DNA樣品中均無(wú)擴(kuò)增。

圖2、火雞源性引物探針靈敏度實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)圖譜。

擴(kuò)增曲線(平滑的弧形線)由左至右分別為：10％火雞DNA，1％火雞DNA，0.1％火雞DNA，0.01％火雞DNA，0.001％火雞DNA，0.0001％火雞DNA。

圖3、火雞肉粉重量比的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)靈敏度圖。

擴(kuò)增曲線從左到右(平滑的弧形線)分別(平滑的弧形線)以下樣品的DNA：10％火雞肉粉；1％火雞肉粉；0.1％火雞肉粉；0.01％火雞肉粉；0.001％火雞肉粉。

具體實(shí)施方式