[發明專利]用模式生物斑馬魚篩選誘導心肌細胞形成的藥物的方法

無效

• 申請號: 201110403099.6
• 申請日: 2011-12-07
• 公開（公告）號: CN102520130A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 鐘濤
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15;C12Q1/02
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;盛志范

1.一種用模式生物斑馬魚篩選誘導心肌細胞形成的藥物的方法，其特征在于，具體步驟為：

（1）、對從藥物庫中取出的各種不同結構的小分子化合物，用二甲亞砜作為助溶劑，配成1mM的儲存液；在表型篩選時，將每種化合物用胚胎培養液稀釋成1-30μM?；

（2）、使心臟轉基因斑馬魚Tg(cmlc2:EGFP)純合體進行交配，獲得胚胎，培養至50%外包期；然后將胚胎轉移至培養板中，每孔置入適量胚胎，同時加入不同小分子化合物的胚胎培養液，在20-30℃胚胎培養箱進行培養；其中，二甲亞砜作為空白對照組；在胚胎發育的不同階段，對胚胎心臟大小和心臟形態進行仔細的檢查，并且通過細胞核標記的轉基因斑馬魚Tg(cmlc2:DsRed-nuc)進行心肌細胞計數；最后對實驗結果進行初步判定，分析各個小分子化合物對心肌細胞形成的影響；

（3）、檢查胚胎的整體形態，及其它器官包括大腦，眼睛，脊索和體節等是否受到影響；通過觀察結果分析判定各個小分子化合物是否對胚胎其它器官有毒性作用。