[發明專利]通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法

無效

• 申請號: 201110398621.6
• 申請日: 2011-12-05
• 公開（公告）號: CN102492685A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 何洪彬;王洪梅;武建明;劉藍;呂洋;楊宏軍;宋玲玲;孫濤;高運東;侯明海;仲躋峰
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院奶牛研究中心
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N15/873;A61D19/04;A01K67/027
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

1.一種通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法，其特征在于：是將線性化的攜帶有報告基因的突變的整合素β6亞基基因的打靶載體轉染羊或豬的胎兒成纖維細胞，通過同源重組獲得替換整合素β6亞基基因的核供體細胞，將核供體細胞核導入羊或豬的去核卵母細胞中得到重構胚，再將重構胚移入代孕羊或豬的子宮中，得到的子代即為整合素β6亞基基因被敲除的雜合子轉基因羊或豬。

2.根據權利要求1所述的通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法，其特征在于，還包括以下方法：雜合子轉基因羊或豬經二次打靶和體細胞克隆獲得純合子轉基因羊或豬；

或：雜合子轉基因公畜和雜合子轉基因母畜正常交配繁殖而獲得純合子轉基因羊或豬。

3.根據權利要求1或2所述的通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法，其特征在于：所述羊為綿羊或山羊。

4.根據權利要求1或2所述的通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法，其特征在于：所述羊或豬胎兒成纖維細胞為35～50日齡胎兒不同組織來源的成纖維細胞。

5.根據權利要求1或2所述的通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法，其特征在于：所述羊或豬胎兒成纖維細胞為耳成纖維細胞、皮膚成纖維細胞、輸卵管上皮細胞或卵丘細胞。

6.根據權利要求1或2所述的通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法，其特征在于：所述將線性化的攜帶有報告基因的突變的整合素β6亞基基因的打靶載體轉染羊或豬胎兒成纖維細胞方法為電轉染法、脂質體轉染法、病毒載體法或磷酸鈣沉淀法。

7.根據權利要求6所述的通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法，其特征在于：所述將線性化的攜帶有報告基因的突變的整合素β6亞基基因的打靶載體轉染羊或豬胎兒成纖維細胞方法為脂質體轉染法。

8.根據權利要求7所述的通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法，其特征在于：所述脂質體轉染法的條件為：線性化的載體DNA濃度不低于1μg/μL，DNA∶脂質體LTX＝1∶3。

9.根據權利要求1或2所述的通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法，其特征在于：所述將線性化的攜帶有報告基因的突變的整合素β6亞基基因的核供體細胞核導入羊或豬的去核卵母細胞的方法為顯微注射法。

10.根據權利要求1或2所述的通過敲除口蹄疫病毒受體整合素β6亞基基因獲得抗口蹄疫轉基因羊或豬的方法，其特征在于：所述去核卵母細胞不帶有第一極體。