[發(fā)明專利]高敏感的內(nèi)切核酸酶的生產(chǎn)方法、內(nèi)切核酸酶的新制品及其用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110393173.0
• 申請日: 2005-07-29
• 公開（公告）號: CN102604914A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 阿卜杜勒菲德·本達(dá)馬內(nèi);貝內(nèi)迪克特·斯圖勒保耶斯;卡利內(nèi)·特里凱斯;米歇爾·卡博什
• 申請（專利權(quán)）人: 法國植物基因組研究計劃-華萊;法國國家農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N9/22
• 分類號: C12N9/22;C12Q1/68;C12Q1/34
• 代理公司: 上海市華誠律師事務(wù)所 31210
• 代理人: 傅強(qiáng)國;賈師英

1.一種重組體BFN1內(nèi)切核酸酶制品，其中所述重組體BFN1具有以下錯配優(yōu)選特性：G/G～G/A～A/G～G/T～T/G＞T/T～A/A～C/C～T/C＞C/T～A/C～C/A，并且能夠在59倍過量野生型等位基因存在下識別突變體等位基因。

2.一種如權(quán)利要求1所述重組體內(nèi)切核酸酶制品的用途，用于檢測在DNA雙鏈體內(nèi)由堿基替代引起的錯配，或者在所述雙鏈體中的一個鏈內(nèi)插入或缺失一個或多個核苷酸引起的錯配。

3.一種如權(quán)利要求1所述的重組體內(nèi)切核酸酶制品在基因組中靶向誘導(dǎo)的局部損害(Targeting-Induced?Local?Lesions?IN?Genomes，TILLING)錯配剪切方案中的用途。

4.一種如權(quán)利要求1所述重組體內(nèi)切核酸酶制品的用途，用于通過Ecotilling鑒別自然群體中DNA的多態(tài)性。

5.一種如權(quán)利要求1所述重組體內(nèi)切核酸酶制品作為錯配檢測試劑的用途。

6.一種如權(quán)利要求1所述重組體內(nèi)切核酸酶制品在錯配篩選方法中的用途。

7.一種如權(quán)利要求1所述重組體內(nèi)切核酸酶制品的用途，用于在任何有機(jī)體種群或由此衍生的細(xì)胞系中的靶基因中同時篩選一個或多個突變，其通過下列步驟進(jìn)行：

a)對所述種群中每一個體的所述靶基因或其部分進(jìn)行擴(kuò)增，

b)將所述擴(kuò)增產(chǎn)品在2維或3維矩陣中進(jìn)行排序，包括行、列(2維矩陣)和柱(3維矩陣)，

c)將所述擴(kuò)增產(chǎn)品集中，以此獲得不同的庫，每一個庫代表所述矩陣的一列、一行或一柱，

d)向每一個庫添加從非突變基因獲得的參照擴(kuò)增產(chǎn)品，并在允許形成異源雙鏈的環(huán)境下對這些庫進(jìn)行培養(yǎng)，以及

e)用所述內(nèi)切核酸酶制品對每一個庫進(jìn)行培養(yǎng)，以及

f)在所述培養(yǎng)的庫中檢測異源雙鏈的存在。

8.一種如權(quán)利要求1所述重組體內(nèi)切核酸酶制品的用途，用于在任何有機(jī)體種群中或由其衍生的細(xì)胞系中對一個靶基因中的一個或多個突變同時進(jìn)行篩選，其中進(jìn)行以下步驟：

a)在包括行、列(2維矩陣)和柱(3維矩陣)的2維或3維矩陣中對所述種群的每一個體進(jìn)行排序，

b)將每一列、行和柱集中以此獲得不同的庫，從而使每一個庫代表所述矩陣的一列、一行或一柱，

c)向每一個庫中添加從非突變基因獲得的參照基因產(chǎn)品，

d)在每一個庫內(nèi)對所述靶基因或其部分進(jìn)行擴(kuò)增，以此獲得擴(kuò)增產(chǎn)品的庫，

e)在允許形成異源雙鏈的環(huán)境下對所述擴(kuò)增產(chǎn)品的庫進(jìn)行培養(yǎng)，

f)用所述內(nèi)切核酸酶制品對所述擴(kuò)增產(chǎn)品的庫進(jìn)行培養(yǎng)，以及

g)在所述培養(yǎng)的庫中檢測異源雙鏈的存在。