[發明專利]一種中藥提取物中聚酰胺殘留物的檢測方法

有效

• 申請號: 201110391851.X
• 申請日: 2011-12-01
• 公開（公告）號: CN103134884A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 葉正良;劉君動;李德坤;周大錚
• 申請（專利權）人: 天津天士力之驕藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所 11130
• 代理人: 王為

1.一種中藥提取物中聚酰胺殘留物的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1，供試品溶液制備；取中藥提取物，加15-25倍量酸水解4-14小時，取水解液調節pH，搖勻，即可；

步驟2，對照品溶液制備；取氨基己酸，加水溶解，定容至容量瓶中，搖勻，即得氨基己酸對照溶液；取己內酰胺，加水溶解，定容至容量瓶中，搖勻，即得己內酰胺對照品溶液；

步驟3，注入高效液相色譜儀，得到色譜圖；

步驟4，根據色譜圖得到供試品溶液中聚酰胺殘留物成分的種類和含量。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟1中所述的中藥提取物是任何一種經過聚酰胺柱層析的中藥提取物樣品。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，步驟1中所述的中藥提取物為銀杏葉提取物或蘆薈提取物或決明子提取物或丹參多酚酸提取物。

4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟1、取丹參多酚酸提取物或銀杏葉提取物或蘆薈提取物或決明子提取物，加15-25倍量酸水解4-14小時，取水解液調節pH，搖勻，加水定容后，精密量取一定溶液過色譜柱，用水洗脫，收集洗脫液并定于容量瓶中，即可；

步驟2，對照品溶液的制備：取氨基己酸，加水溶解，定容至容量瓶中，搖勻，即可；取己內酰胺，加水溶解，定容至容量瓶中，搖勻，即得己內酰胺對照品溶液；

步驟3，注入色譜儀，得到色譜圖；

步驟4，根據色譜圖得到供試品溶液中聚酰胺殘留物成分的種類和含量。

5.根據權利要求1或4所述的檢測方法，其特征在于，步驟1中所述的酸為18-22倍量的硫酸或濃鹽酸，酸解時間為4-12小時，pH值為5-8；步驟2中氨基己酸對照溶液濃度為1.5-2.0mg/ml，己內酰胺對照品溶液濃度為1.5-2.0mg/ml。

6.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟1中的酸為20倍量濃鹽酸，回流12h，pH至6-7。

7.根據權利要求1或4所述的檢測方法，其特征在于，步驟3中所述的高效液相色譜條件：

測定氨基己酸的高效液相色譜條件如下：色譜柱：250×4.6mm，5μm，流動相：甲醇-水梯度洗脫如表1；柱溫：30-35℃；檢測波長：209nm；流速：0.5-1.0mL.min^-1；進樣量為8-15μL；

表1梯度條件

測定己內酰胺的高效液相色譜條件如下：色譜柱：250×4.6mm，5μm；流動相：乙腈-水梯度洗脫；檢測波長為209nm；柱溫：30-35℃；流速為0.5-1.5mL.min^-1；進樣量為10-15μL；

表2梯度條件

8.根據權利要求7的檢測方法，其特征在于，步驟3中所述的高效液相色譜條件：測定氨基己酸的高效液相色譜條件為色譜柱：T3250×4.6mm，5μm，；流動相：甲醇-水梯度洗脫見表1，柱溫：30℃；檢測波長：209nm；流速：0.5mL.min^-1；進樣量為10μL，

表1梯度條件

測定己內酰胺的高效液相色譜條件：色譜柱：watersC₁₈250×4.6mm，5μm柱，流動相：乙腈-水梯度洗脫見表2；檢測波長為209nm；柱溫：35℃；流速為1.0mL.min^-1；進樣量為10μL，

表2梯度條件

9.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，還增加測定檢測限步驟，其中最低檢測量為4.4-4.6ng，最低檢測濃度為4.4-4.5μg.mL^-1。

10.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1，供試品溶液的制備：取丹參多酚酸提取物2.0g，加入40ml濃鹽酸，加熱回流水解12h，將水解液過濾，加水定容至50mL，搖勻，精密量取上述水解液10mL，加入氫氧化鈉溶液調節pH至6-7，加水定容至25mL容量瓶中，搖勻，備用。精密量取上述溶液10mL，上已處理好的SPE商品柱，流速約1.0mL·min^-1，用水15mL洗脫，收集洗脫液于25mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，

步驟2，對照品溶液的制備：取氨基己酸89.87mg，加水溶解，定容至50mL容量瓶中，搖勻，即可；

步驟3，注入色譜儀，得到色譜圖；

步驟4，根據色譜圖得到供試品溶液中聚酰胺殘留物成分的種類和含量；其中氨基己酸液相色譜條件

色譜柱：T3??250×4.6mm，5μm；流動相：甲醇-水梯度洗脫見表3；柱溫：30℃；檢測波長：209nm；流速：0.5mL.min^-1；進樣量為10μL。

表3梯度條件