[發(fā)明專利]一種提取藍萼香茶菜總二萜或藍萼甲素的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110387128.4
• 申請日: 2011-11-29
• 公開（公告）號: CN102389456A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張健;姚士;沈曉丹;徐乃玉;褚純雋;吳雙慶
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號: A61K36/53
• 分類號: A61K36/53;C07C49/743;A61P1/04;A61P1/16;A61P15/14;A61P19/02;A61P29/00;A61P31/20;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥提取領(lǐng)域，涉及一種以藥材藍萼香茶菜為原材料制備藍萼香茶菜總二萜或藍萼甲素的方法。

背景技術(shù)

藍萼香茶菜(Isodon?japonica?var?glaucocalyx?(Maxim)?Hara)為唇形科香茶菜屬植物，廣泛分布在我國的東北，華北，華東等地區(qū)；具有健胃、清熱解毒、活血、抗菌消炎等活性，用于治療胃炎，脘腹脹痛，肝炎初期，感冒發(fā)熱，乳腺炎、關(guān)節(jié)痛等。藍萼香茶菜主要含有藍萼甲素、藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素、glaucocalyxin?F、glaucocalyxin?X,等對映-貝殼杉烷型二萜（參見：Zhao?Bao?Xiang,?et?al.?Two?new?diterpenoids?from?Rabdosia?japonica?var.?glaucocalyx.?Chinese?Chemical?Letters.?2008,19:?852，曹露曄等，藍萼香茶菜研究進展，云南中醫(yī)中藥雜志，2004,?25?(3)?:42.）。藍萼香茶菜中的二萜類成分是其主要活性物質(zhì)，藍萼甲素可抑制卡西霉素刺激的兔血小板生成血小板活化因子，能抑制花生四烯酸誘導(dǎo)的兔血小板血栓素A2生成，并同時升高前列腺素E2，能顯著抑制ADP，AA，PAF等誘導(dǎo)的兔血小板聚集，顯著升高血小板內(nèi)cAMP水平（參見：Zhang?B,?Long?K.?Effects?of?glaucocalyxin?A?on?aggtegation?and?cAMP?levels?of?rabbit?platelets?in?vitro.?Acta?Pharmacologica?Sinica?1993,?14?(4):?347.?）藍萼甲素對艾氏腹水癌有一定抑制作用，體內(nèi)對S180實體瘤抑制率達30.4%（10mg/kg，7天），（參見：張淑香等，藍萼甲素在體外對DNA,?RNA和蛋白質(zhì)生物合成的影響，藥學(xué)情報通訊，1990,?8?(3)?:?238.?）。藍萼甲素、藍萼乙素、藍萼丁素、藍萼戊素、藍萼己素對A549（人肺癌細胞）、LOVO（人腸癌細胞）、6T-CEM（人T細胞白血病細胞）、HL-60（人白血病細胞）具有較強的細胞毒活性，可用于制備抗癌藥物（參見：陳海生等，藍萼香茶菜中二萜類化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，專利號為200910044882.0的中國發(fā)明專利）；藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素進行了抗乙肝表面抗原和乙肝核心抗原試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，它們具有顯著的抗乙肝病毒活性，可用于制備抗乙肝病毒的藥物（參見：陳海生等，藍萼香茶菜中二萜類化合物在制備抗肝炎病毒藥物中的應(yīng)用，專利號為200910044883.5的中國發(fā)明專利）。

現(xiàn)有技術(shù)中，從藥材藍萼香茶菜中提取藍萼甲素的方法不僅步驟繁瑣，得率偏低，普遍低于10%，而且由于采用對生物體具有毒性的溶劑，殘留的有毒溶劑不符合藥典要求，具體包括以下步驟：

采集藥材藍萼香茶菜地上部分并粉碎，在常壓下，用體積百分?jǐn)?shù)85%~95%乙醇水溶液回流提取2~3次，每次回流提取2小時，合并提取液，減壓回收溶劑，至每毫升溶劑含原藥材3~10g；

用等體積的石油醚萃取三次，石油醚層棄去，水層再用等體積氯仿萃取三次，合并氯仿層并濃縮，得到氯仿萃取液；

向步驟所得氯仿萃取液中加入硅膠攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層析；以氯仿：甲醇200:1或氯仿：甲醇100:1洗脫，以薄層層析對照，收集含有藍萼甲素的洗脫液，將洗脫液回收溶劑；

以無水乙醇或甲醇反復(fù)結(jié)晶，得藍萼甲素，測試純度，計算得率。

采用上述技術(shù)方案所得藍萼甲素的純度一般在90%以上，但得率一般為7%~9%，而且過程中使用了有毒的溶劑，氯仿、甲醇，并且殘留的有毒溶劑會影響藍萼甲素作為藥物的使用，不符合藥典要求。

公開號為CN?101914002的中國發(fā)明專利申請公開了一種藍萼甲素的提取方法，提取、硅膠柱層析洗脫色素和雜質(zhì)、純化步驟，具體包括以下步驟：

采集原藥材藍萼香茶菜地上部分并粉碎，在常壓下，用體積百分?jǐn)?shù)75~80%乙醇水溶液回流提取2~3次，每次回流提取2~3小時，合并提取液，減壓除去部分溶劑，得濃縮提取液；

向步驟所得濃縮提取液中加入硅膠并攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層析：以硅膠柱體積為1體積份，首先以2~3份體積份的洗脫液A洗脫脂溶性色素，再以4~6份體積份的洗脫液B洗脫雜質(zhì)，最后以10~15份體積份的洗脫液C洗脫；收集洗脫液，濃縮后放置，析出晶體；