[發(fā)明專利]待測物的電化學檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110386111.7 | 申請日： | 2011-11-29 |
| 公開（公告）號： | CN102539506A | 公開（公告）日： | 2012-07-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 鈴木誓吾;清家圣嘉;巖永茂樹;堀信康;桐村浩哉 | 申請（專利權(quán)）人： | 希森美康株式會社 |
| 主分類號： | G01N27/416 | 分類號： | G01N27/416 |
| 代理公司： | 北京市安倫律師事務(wù)所 11339 | 代理人： | 劉良勇 |
| 地址： | 日本兵庫縣神戶市*** | 國省代碼： | 日本;JP |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 待測物 電化學 檢測 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種待測物的電化學檢測方法。更詳細地說，本發(fā)明涉及一種待測物的電化學檢測方法，該方法用于核酸、蛋白質(zhì)等待測物的檢測和定量等，還用于用上述物質(zhì)進行疾病的臨床檢查和診斷等。
背景技術(shù)：
在疾病的臨床檢查和診斷中，一般是用基因檢測法和免疫學檢測法等檢測方法檢測生物試樣中所含的上述疾病的相關(guān)基因和蛋白質(zhì)等。在這種臨床檢查和診斷的方法中，已知有待測物的電化學檢測方法。具體而言，人們提出的方法中，將下述物用于檢測基因和蛋白質(zhì)等待測物：用光激勵具有光化學活性的標記物所產(chǎn)生的電流、對具有電化學活性的標記物施加電壓所產(chǎn)生的光或光激勵所產(chǎn)生的電流。
在此，當檢測樣本中的待測物并進行臨床檢查和診斷時，往往要求高靈敏度地檢測出樣本中所含微量待測物。因此，比如美國專利公報(U.S.Patent?Publication)第2006/078912號中提出了用載體粒子檢測待測物的方法，其中該載體粒子具有有電化學活性的眾多ECL和與待測物結(jié)合的探針。在此，當進行ECL電化學發(fā)光檢測時，溶解上述載體，釋放ECL，使之分散。以此提高ECL與電解質(zhì)的接觸效率，提高檢測靈敏度。如此，人們期望開發(fā)出一種能用電化學檢測方法更靈敏地檢測待測物的電化學檢測方法。
發(fā)明內(nèi)容：
本發(fā)明的范圍只由后附權(quán)利要求書所規(guī)定，在任何程度上都不受這一節(jié)發(fā)明內(nèi)容的陳述所限。
本發(fā)明的目的在于提供一種能比以往方法更靈敏地檢測出待測物的電化學檢測方法。
本發(fā)明人經(jīng)過銳意鉆研，發(fā)現(xiàn)通過以下三點可以解決上述課題：
(1)在工作電極上形成含有標記結(jié)合物和待測物的復合物，其中，該標記結(jié)合物具有與待測物結(jié)合的結(jié)合物和含標記物的修飾標記物相結(jié)合的溶解性載體，
(2)溶解此復合物中的標記結(jié)合物中所含溶解性載體，以及
(3)將修飾標記物誘導至工作電極上。
即，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當對待測物進行電化學檢測時，通過上述(1)～(3)的操作，無論待測物的大小等，可以高效獲取基于與待測物的量相應(yīng)的標記物的信號，從而得以高靈敏度地對待測物進行電化學檢測。
本發(fā)明正是基于本發(fā)明人的這種發(fā)現(xiàn)。
因此，本發(fā)明提供：
(1)一種用電化學方式檢測待測物的方法，包括：讓含有待測物的試樣接觸工作電極，并將其捕捉在工作電極上；讓標記結(jié)合物接觸捕捉有所述待測物的工作電極，在所述工作電極上形成含有所述待測物與所述標記結(jié)合物的復合物，其中，所述標記結(jié)合物有與待測物結(jié)合的結(jié)合物和含標記物的修飾標記物相結(jié)合的溶解性載體；通過溶解所述工作電極上形成的復合物中所含所述溶解性載體，使所述修飾標記物游離；將所述修飾標記物誘導到工作電極上；對所述修飾標記物中的標記物進行電化學檢測。
(2)根據(jù)(1)所述的方法，其中：修飾標記物還含有誘導用修飾物。
(3)根據(jù)(2)所述的方法，其中：誘導用修飾物為核酸。
(4)根據(jù)(3)所述的方法，其中：核酸是DNA或RNA。
(5)根據(jù)(1)～(4)其中任意一項所述的方法，其特征在于：在誘導步驟中，靠極性的不同將所述修飾標記物誘導到工作電極上。
(6)根據(jù)(5)所述的方法，其中：用含有離液序列高的離子(Chaotropic?ion)的液體產(chǎn)生所述不同極性。
(7)根據(jù)(6)所述方法，其中：離液序列高的離子為以下物質(zhì)構(gòu)成的群中的至少一種：碘化物離子、溴化物離子、胍離子、硫氰酸離子、三溴乙酸離子、三氯乙酸離子、高氯酸離子、二氯乙酸離子、硝酸離子、氯化物離子、乙酸離子、鋇離子、鈣離子、鋰離子、銫離子、鉀離子、鎂離子。
(8)根據(jù)(1)～(4)其中任意一項所述的方法，其中：在游離步驟中，用溶解溶解性載體的溶劑使所述溶解性載體溶解。
(9)根據(jù)(8)所述方法，其中：溶解性載體由溶解于溶劑的金屬或其合金構(gòu)成。
(10)根據(jù)(9)所述的方法，其中：溶解性載體為金納米粒子。
(11)根據(jù)(8)所述的方法，其中：溶劑含有碘或碘化物。
(12)根據(jù)(1)～(4)其中任意一項所述的方法，其中：溶解性載體是因熱而熔解的載體；在游離步驟中，通過加熱該溶解性載體使所述溶解性載體溶解。
(13)根據(jù)(1)～(4)其中任意一項所述的方法，其中：在檢測步驟中，在有電解液存在的情況下對修飾標記物中的標記物進行電化學檢測。
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