[發(fā)明專利]一種可緩慢釋放抗腫瘤適體藥物的微囊及其制備工藝

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110375301.9
• 申請(qǐng)日: 2011-11-22
• 公開（公告）號(hào): CN102416008A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 刁勇;林俊生;王立強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華僑大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K9/50
• 分類號(hào): A61K9/50;A61K47/42;A61K31/7088;A61K31/7084;A61P35/00
• 代理公司: 泉州市文華專利代理有限公司 35205
• 代理人: 戴中生

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種可緩慢釋放抗腫瘤適體藥物的微囊及其制備工藝。

背景技術(shù)

腫瘤的生長(zhǎng)發(fā)展可分為血管前期和血管化期。在腫瘤形成的早期-瘤體內(nèi)并無血管生長(zhǎng)，此為血管前期。這時(shí)-腫瘤生長(zhǎng)依靠氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的彌散來維持-一般僅能長(zhǎng)到2-3毫米。此期腫瘤細(xì)胞的增生和凋亡處于平衡狀態(tài)。此時(shí)腫瘤生長(zhǎng)緩慢，可持續(xù)多年，相當(dāng)于臨床上的原位癌，幾乎不發(fā)生轉(zhuǎn)移。腫瘤的進(jìn)一步生長(zhǎng)有賴于隨后的血管新生表型啟動(dòng)，促使腫瘤形成新生血管-進(jìn)入血管化期。此期腫瘤組織主要以血流灌注的方式獲取營(yíng)養(yǎng)，腫瘤細(xì)胞呈指數(shù)生長(zhǎng)，且凋亡減少，導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)加速。新生血管也為腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移提供了有利條件。

血管內(nèi)皮生成因子(VEGF)是血小板源生長(zhǎng)因子超家族中的一員，目前主要包括VEGF-A、胎盤生長(zhǎng)因子、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和VEGF-E，VEGF-A是其中最重要的成員。VEGF通過其受體VEGFR介導(dǎo)下游信號(hào)的傳導(dǎo)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，分化成熟，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞遷移，并促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞合成和分泌基質(zhì)金屬蛋白酶，加速基質(zhì)降解以及趨化炎癥細(xì)胞等，最終促使新毛細(xì)血管生成和功能成熟。在組織缺氧的情況下，HIF-1a(缺氧誘導(dǎo)因子-1α)和MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)等細(xì)胞因子會(huì)促進(jìn)VEGF的表達(dá)和分泌。VEGF不僅能誘導(dǎo)癌血管生成，促進(jìn)癌生長(zhǎng)，還可能參與癌細(xì)胞耐藥性的形成。因此VEGF是抗癌藥物最重要的靶點(diǎn)。

適體是功能相當(dāng)于抗體的DNA或RNA片段，能夠?qū)Π蟹肿舆M(jìn)行特異性識(shí)別和結(jié)合，并有效抑制靶分子的生物學(xué)活性。適體的應(yīng)用前景更為廣泛。目前針對(duì)血液疾病、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病、腫瘤等疾病的診斷與治療方面的適體研究已經(jīng)在進(jìn)行中，一些適體制劑已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)，專門用于治療黃斑變性的靶向作用于VEGF的適體藥物(Macugen)已經(jīng)上市。

適體是核酸分子，在體內(nèi)極易被核酸酶降解而表現(xiàn)出極大的不穩(wěn)定性，并且會(huì)通過腎臟迅速排出體外而來不及發(fā)揮其功能，嚴(yán)重限制了它在治療領(lǐng)域的實(shí)際應(yīng)用。

目前尚無理想的方法解決適體的體內(nèi)穩(wěn)定性問題。但研究表明這個(gè)問題可以通過對(duì)它進(jìn)行適當(dāng)修飾得以改善，修飾后的適體穩(wěn)定性和抗降解能力增強(qiáng)，從而在血漿中穩(wěn)定存在的時(shí)間也明顯延長(zhǎng)。這種修飾技術(shù)可分為兩大類：分子內(nèi)修飾和分子外修飾。分子內(nèi)修飾是通過一些化學(xué)方法，將影響體內(nèi)穩(wěn)定性的基團(tuán)，用另一些相應(yīng)的基團(tuán)取代。修飾的對(duì)象有糖環(huán)、堿基和磷酸，其中以糖環(huán)的修飾最為普遍。將氟、氨基和2’-氧-甲基基團(tuán)引入戊糖糖環(huán)上的2′位，可以顯著增加適體的抗核酸酶降解特性。此外，由于體液中的核酸酶只識(shí)別D型糖環(huán)而對(duì)L型糖環(huán)無作用，所以可通過將D型糖環(huán)修飾成L型糖環(huán)達(dá)到抗核酸酶降解的目的。除糖環(huán)修飾外，還可進(jìn)行堿基和磷酸的修飾。分子內(nèi)修飾雖可以提高適體在體內(nèi)的穩(wěn)定性，但在臨床治療方面還不能保證足夠的藥代動(dòng)力學(xué)特征，因?yàn)檫m體在靜脈注射后幾分鐘內(nèi)就可能通過腎臟排泄而被清除。要解決該問題可將它與某些具有生物相容性，但沒有生物活性的大分子連接，延長(zhǎng)其在體內(nèi)的作用時(shí)間，即分子外修飾。聚乙二醇(PEG)與適體共價(jià)結(jié)合，能防止其快速被血漿清除。Pegaptanib(Ng?EWM，等。Nature?Reviews?Drug?Discovery?2006，5：123-132)即采用了該技術(shù)。但如此修飾的核苷酸可以循環(huán)進(jìn)入宿主的DNA，從而引發(fā)安全隱患。聚乙二醇偶聯(lián)后，Pegaptanib體內(nèi)半衰期提高至10小時(shí)左右，但如用于腫瘤治療，仍然需要每天注射給藥。

采用緩釋制劑技術(shù)也應(yīng)當(dāng)是長(zhǎng)期維持適體藥物在體內(nèi)有效濃度的方法之一，但對(duì)于適體藥物，何種制劑最適合仍無明確方法和技術(shù)。本發(fā)明即為適體藥物的緩慢釋藥提供了可行方法。微囊內(nèi)包裹的活性成分，即可以靶向作用于VEGF的適體藥物。該適體藥物可以阻礙VEGF與受體的結(jié)合，從而抑制腫瘤的新生血管生成。經(jīng)微囊包裹后，適體藥物可以緩慢釋放，在體內(nèi)維持穩(wěn)定的血藥濃度，克服了常規(guī)制劑使用劑量大，作用時(shí)間短，需反復(fù)用藥的缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供了一種可緩慢釋放抗腫瘤適體藥物的微囊及其制備工藝。本發(fā)明解決了適體藥物的緩釋問題，可以明顯提高藥物的體內(nèi)活性。

為了達(dá)成上述目的，本發(fā)明的解決方案是：

一種可緩慢釋放抗腫瘤適體藥物的微囊，采用人血白蛋白包裹適體藥物形成微囊，該微囊的粒徑為150-350nm，在體內(nèi)外緩慢釋放內(nèi)含的適體藥物。

所述的適體藥物為抗血管內(nèi)皮生成因子165(VEGF165)的適體藥物，具有抑制腫瘤新生血管生成的活性。