[發明專利]一種甘藍型油菜粒重性狀的分子標記及制備方法與應用

有效

• 申請號: 201110374200.X
• 申請日: 2010-05-04
• 公開（公告）號: CN102703438A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 周永明;傅廷棟;范楚川;蔡光勤
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

1.一種甘藍型油菜品種甲A254和甲A177粒重性狀的分子標記TTG2a，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：7所示。

2.擴增如權利要求1所述的甘藍型油菜品種甲A254和甲A177粒重性狀的特異性分子標記TTG2a的引物對，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：14和SEQ?ID?NO：15所示。

3.一種甘藍型油菜粒重性狀的特異性分子標記的制備方法，其步驟包括：

a)用甘藍型油菜甲A254為母本與甘藍型油菜甲A177為父本雜交，得到F1；

b)種植獲得的F1，從所述的F1植株的花蕾中通過小孢子培養獲得分離的雙單倍體(DH)群體；

c)對獲得的DH群體中的每一個株系進行分子標記分析，分離DH群體每一個株系的基因組DNA，采用SSR引物進行PCR擴增，擴增產物用體積為6％的聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，經銀染、顯影后，獲得每個株系的基因型；

d)用獲得基因型構建甘藍型油菜遺傳連鎖圖；

e)測定DH群體的每個株系的成熟種子的千粒重數值；

f)將千粒重數值與甘藍型油菜遺傳連鎖圖中的分子標記進行連鎖和QTL分析，得到與粒重的QTL位點；QTL檢測采用QTL?Cartographer?V2.0(Wang?et?al.，2007)軟件中的復合區間作圖法(CIM)進行；

其特征在于，步驟如下：

1)搜尋NCBI核苷酸數據庫，找到一個和擬南芥控制種子大小的相關基因TTG2基因序列高度同源的白菜BAC克隆AC232555，根據AC232555的序列信息，設計一對擴增TTG2基因全長的引物對TTG2F/R，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：10和11所示；從甘藍型油菜甲A177和甲A254中擴增出TTG2基因的基因組片段，克隆和測序；

2)根據甘藍型油菜甲A177和甲A254基因組核苷酸序列的差異，設計TTG2基因的SNP標記TTG2a，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：14和SEQ?ID?NO：15所示；利用所述的分子標記TTG2a，重復步驟c)的方法，獲得每一個株系的基因型；重復步驟f)的連鎖分析方法，將所述的分子標記TTG2a定位在步驟b)的DH群體的A5連鎖群上；

3)根據SEQ?ID?NO：14和SEQ?ID?NO：15所示的引物對進行PCR擴增，得到能夠區分甘藍型油菜大粒種子與小粒種子的TTG2基因的特異性分子標記TTG2a，所述分子標記TTG2a的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：7所示；其中能夠進行PCR擴增的判定為大粒材料，不能進行PCR擴增的判定為小粒材料。

4.權利要求1所述的分子標記在甘藍型油菜甲A254和甲A177粒重性狀標記輔助選擇中的應用。

5.權利要求2所述的引物對在甘藍型油菜甲A254和甲A177粒重性狀標記輔助選擇中的應用。