[發(fā)明專利]一種可高效高特異滅殺乳腺癌細胞的藥物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110371596.2
• 申請日: 2011-11-21
• 公開（公告）號: CN102423493A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝小明;郭姣麗;謝新華;李來勝;孔亞楠
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學腫瘤防治中心
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K9/127;A61P35/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物領(lǐng)域，具體涉及一種可高效高特異滅殺乳腺癌細胞治療載體及其藥物。

背景技術(shù)：

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率逐年增高，嚴重危害了身體健康。乳腺癌手術(shù)治療主要針對早中期乳腺癌，術(shù)后和晚期一般需綜合治療。化放療不能殺滅乳腺癌干細胞，導(dǎo)致復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。綜合治療后，預(yù)后仍不滿意，中晚期患者5年生存率僅10％-30％。三陰乳腺癌預(yù)后更差。乳腺癌干細胞是乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和耐藥的主要原因。因此，迫切需要探索高效靶向殺滅乳腺癌的新藥物。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的第一個目的是提供一種高效靶向乳腺癌BCL-2靶點，可高效高特異滅殺乳腺癌細胞的T-VISA-BikDD治療載體。

本發(fā)明克隆端粒酶啟動子hTERT，長度為418bp，具有腫瘤細胞特異性，但其活性在腫瘤細胞中不到CMV啟動子活性的1％，因此無法廣泛應(yīng)用，本發(fā)明首先將hTERT啟動子控制Gal4-VP2(兩個拷貝的VP16，具有強烈的轉(zhuǎn)錄激活特性)融合蛋白基因；再將Gal4-VP2融合蛋白與Gal4效應(yīng)元件G5E4T結(jié)合，啟動靶基因或目的基因的大量轉(zhuǎn)錄；然后將WPRE位于目的基因的3-UTR，增強mRNA穩(wěn)定性的作用，由此構(gòu)建得到hTERT-VP16-GAL4-WPRE(VP16-GAL4-WPRE?Integrated?Systemic?Amplifier，VISA，整合性系統(tǒng)放大器)調(diào)控系統(tǒng)，簡稱為T-VISA(整合性系統(tǒng)放大器)系統(tǒng)，最后，結(jié)合BiKDD基因(突變的Bik自殺基因，與Bcl-2結(jié)合，釋放Bad和Bax，導(dǎo)致細胞凋亡)作為治療基因，建立T-VISA-BiKDD治療載體，該T-VISA-BiKDD治療載體的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種可高效高特異滅殺乳腺癌細胞的藥物T-VISA-BikDD脂質(zhì)體，其特征在于，包括脂質(zhì)體和被脂質(zhì)體包被的T-VISA-BiKDD治療載體，所述的T-VISA-BiKDD治療載體的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

所述的脂質(zhì)體可以使用按照常規(guī)方法制備的脂質(zhì)體，優(yōu)選是通過以下方法制備的脂質(zhì)體：按照1摩爾膽固醇對應(yīng)1.7摩爾磷脂酰膽堿的比例，秤取磷脂酰膽堿與膽固醇，用磷脂酰膽堿質(zhì)量1/4的氯仿作為溶劑溶解磷脂酰膽堿與膽固醇，將上述溶液置于旋轉(zhuǎn)燒瓶中，旋轉(zhuǎn)燒瓶使其混合均勻，再用真空抽吸器吸干溶劑，得到一層附著在燒瓶壁上的脂膜；然后再用按8.9/100ml/g磷脂酰膽堿的量加入質(zhì)量分數(shù)為5％的葡萄糖溶液溶解已干燥的脂膜，旋轉(zhuǎn)真空干燥，然后再加入雙蒸水至上述質(zhì)量分數(shù)為5％的葡萄糖溶液的體積，在50℃的超聲水浴箱中進行超聲處理1min，再在50℃下收集通過0.1μm的聚碳酸酯膜濾膜的脂質(zhì)體。通過該方法制備的脂質(zhì)體粒徑為180nm左右，容許其穿透腫瘤細胞中極細的毛細血管并被細胞攝取。

所述的藥物T-VISA-BikDD脂質(zhì)體優(yōu)選通過以下方法制備的，將上述脂質(zhì)體加入到5％的葡萄糖溶液中使脂質(zhì)體的濃度為8mM，將T-VISA-BiKDD治療載體加入到5％的葡萄糖溶液中使T-VISA-BiKDD治療載體的濃度為1μg/μl，然后將脂質(zhì)體溶液和T-VISA-BiKDD治療載體溶液混合靜置20min，由此得到藥物T-VISA-BikDD脂質(zhì)體。利用該方法制備得到的藥物T-VISA-BikDD脂質(zhì)體的粒徑200～300nm，穩(wěn)定性好，在4～8℃，1-2年無降解。

本發(fā)明的藥物T-VISA-BikDD脂質(zhì)體在體外能高效殺滅一般乳腺癌細胞、三陰乳腺癌細胞和乳腺癌干細胞細胞系，而對正常細胞無殺滅作用，在動物模型中可抑制乳腺癌細胞的生長，延長小鼠的生存時間，對小鼠行為無明顯影響，無死亡發(fā)生，無肝腎毒性。

由此可見，本發(fā)明的T-VISA-BikDD治療載體經(jīng)脂質(zhì)體包裹輸送后，在乳腺癌部位富集，可高效靶向乳腺癌BCL-2靶點，與Bcl-2結(jié)合，釋放Bad和Bax，導(dǎo)致乳腺癌細胞凋亡，而對正常細胞無滅殺作用，可全身給藥，基因表達量高、時間長、效率高，藥效確切，毒副作用低，無肝腎毒性，在治療乳腺癌的具有廣闊的前景。

附圖說明：

圖1是T-VISA-BikDD結(jié)構(gòu)示意圖，它是以pUK-21為基本骨架，kana抗性的可治療性載體；