[發(fā)明專利]一種組織勻漿增效劑及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110370969.4
• 申請日: 2011-11-21
• 公開（公告）號: CN102443657A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉全國;馬貴平;李炎鑫;史喜菊;李冰玲;劉哲明
• 申請（專利權(quán)）人: 中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;G01N33/68;G01N1/38;C12R1/93
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種組織勻漿增效劑及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

朊病毒既可引起人類疾病，也可引起動物疾病。人類朊病毒病（Prion?Diseases）或稱為傳染性海綿樣腦病（The?Transmissible?Spongiform?Encephalopathies,?TSEs）克包括雅氏病（CJD）、庫魯病（Kuru）、吉斯綜合癥（GSS）、致死性家族失眠癥（FFI）等，動物TSEs疾病包括羊瘙癢病（Scrapie）、瘋牛病（BSE）、鹿萎縮病（CWD）等。

朊病毒（Prion）是一種傳染性的蛋白質(zhì)，不含疾病所特有的核酸。這種傳染性的蛋白質(zhì)是由正常的生理型蛋白質(zhì)（PrPC）在特定外因和內(nèi)因的“誘導(dǎo)”下，蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象發(fā)生改變,由α螺旋變成β片層，形成傳染性的病理型蛋白質(zhì)（PrPSc），這類疾病的實驗室診斷標(biāo)志物是PrPSc。中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織例如大腦和脊髓組織含有高濃度的PrPSc，是診斷這類疾病理想的組織病理材料，但是使用大腦和脊髓組織進行實驗室檢測時必須殺死動物，而進行臨床上檢測時多用于尸體解剖。非中樞神經(jīng)系統(tǒng)如脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、直腸等組織中PrPSc含量很低，但是在疾病的早期診斷中非常重要，因為當(dāng)動物感染疾病時，這類組織最先聚集PrPSc。由于這類組織含有較多結(jié)締組織，制備勻漿時組織細(xì)胞不易破碎，很難勻漿徹底，這樣PrPSc就不能很好地從細(xì)胞碎片中分離出來，而影響檢測診斷的準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是提供一種組織勻漿增效劑。該組織勻漿增效劑可以提高勻漿效果而對勻漿液中的化學(xué)成分沒有影響。

本發(fā)明所要解決的第二個技術(shù)問題是提供一種組織勻漿增效劑的制備方法。

本發(fā)明所要解決的第三個技術(shù)問題是提供一種利用組織勻漿增效劑制備組織勻漿液的方法。該方法尤其適用于非中樞神經(jīng)系統(tǒng)如脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、直腸等含有較多結(jié)締組織的組織器官，制備勻漿時使組織細(xì)胞更易破碎，勻漿徹底。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種組織勻漿增效劑，它是粒徑為1~2mm的沙粒。

該組織勻漿增效劑是通過將建筑工程用的沙子原料用水洗滌，然后用雙層紗布過濾，篩選出粒徑為1~2mm的沙粒。

本發(fā)明還提供了一種制備組織勻漿液的方法，該方法是在進行組織勻漿時，加入粒徑為1~2mm的沙粒，與勻漿液一起勻漿；所述沙粒重量/勻漿液體積為0.02~0.05g/mL。

進一步地，所述制備組織勻漿液的方法尤其適用于脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、直腸或肌肉組織等含有較多結(jié)締組織的組織器官。

進一步地，所述勻漿的條件為10秒/次，間隔30秒，勻漿3~5次。

本發(fā)明的有益效果：

（1）對于含有較多結(jié)締組織或肌肉組織的樣本檢測來說，因為這些組織細(xì)胞不易破碎，很難勻漿徹底，給檢測低含量病毒帶來了困擾。通過本發(fā)明所述的組織勻漿方法，可以達(dá)到很好的勻漿效果。

（2）本發(fā)明是將建筑工程用的沙子用于組織樣本的勻漿處理，通過控制沙子的粒徑及加入量，有效解決了較難破碎組織的勻漿液制備，增強了組織勻漿效果，而且對于勻漿液中的化學(xué)成分沒有任何影響，并且節(jié)約了檢測成本。

下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明作進一步說明，不以任何方式限制本發(fā)明。凡是依照本發(fā)明公開內(nèi)容所進行的任何本領(lǐng)域等同替換，均屬于本發(fā)明的保護范圍。

具體實施例方式

實施例1?動物脾臟組織勻漿液的制備：

1.?取組織塊（200mg），在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，放入2ml的微離心管中。

2.用移液管量取1.8ml預(yù)冷的組織勻漿介質(zhì)（0.86％冷生理鹽水），勻漿液終體積為2ml，勻漿介質(zhì)的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍。

3.用水洗滌過的沙子再用雙層紗布過濾，篩選粒徑為1~2mm的粗沙粒，稱重已篩選的粗沙粒40-100?mg加入到勻漿液中與脾臟組織一起勻漿。

4.用組織勻漿機在冰水中進行上下研磨10％組織勻漿，勻漿時間10秒/次，間隙30秒，連續(xù)3～5次），取少量組織勻漿做涂片，顯微鏡下觀察細(xì)胞是否磨破，若沒有破則可以延長勻漿時間。

5.將制備好的10％勻漿用微型離心機或低溫低速離心機3000r/min左右離心1分鐘，將離心好的勻漿留下上清液，廢棄下面沉淀的細(xì)胞碎片。根據(jù)實驗需要，取適量上清夜進行脾臟組織里PrPSc測定。