[發(fā)明專利]鑒定或輔助鑒定貓組織和/或器官的PCR引物對(duì)及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110363137.X
• 申請(qǐng)日: 2011-11-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102382891A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于雷;姜艷彬;王海;李通;尹艷;侯東軍;楊紅菊;李穎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 侯東軍
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及鑒定或輔助鑒定動(dòng)物組織和/或器官的PCR引物對(duì)及其應(yīng)用，特別涉及可以鑒定或輔助鑒定貓、牛、羊、豬、雞這五種動(dòng)物中至少一種動(dòng)物的組織和/或器官的PCR引物對(duì)。

背景技術(shù)

目前在國(guó)內(nèi)生肉和肉制品的生產(chǎn)和銷售領(lǐng)域，一些不法商販為了牟取暴利，利用摻雜摻假等手段欺騙消費(fèi)者的事件時(shí)有發(fā)生，比如用貓肉冒充豬肉、牛肉和羊肉等。因此一套快速、準(zhǔn)確鑒別肉種類，并且能夠適應(yīng)混合肉制品鑒定的方法，無(wú)疑會(huì)為執(zhí)法人員提供了強(qiáng)大的技術(shù)支撐。

傳統(tǒng)的肉制品鑒定的方法主要是基于蛋白質(zhì)水平的分析，包括電泳法、免疫法、ELISA等技術(shù)。操作過(guò)程中首先需制備相應(yīng)物種的抗體，然后抗原和抗體間進(jìn)行免疫反應(yīng)，最后通過(guò)電泳或者顯色等方法進(jìn)行鑒別。這類鑒別技術(shù)受蛋白質(zhì)(主要起作用的部分為抗原決定簇)結(jié)構(gòu)的影響很大，實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常出現(xiàn)的問(wèn)題包括：1.熱加工過(guò)程會(huì)改變蛋白質(zhì)(抗原決定簇)的結(jié)構(gòu)，因而無(wú)法檢測(cè)熱加工的肉類；2.對(duì)混合肉類的檢測(cè)可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)，因?yàn)椴煌锓N蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可能具有某種程度的相似性，檢驗(yàn)的靈敏程度取決于制備的抗體的特異性強(qiáng)弱。

基于以上原因，以核酸為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法成為近幾年食品檢測(cè)領(lǐng)域的發(fā)展方向，包括DNA分子雜交法和PCR方法等。DNA分子雜交法操作復(fù)雜，且成本較高，目前以逐漸被PCR方法所取代。PCR方法靈敏度高、特異性強(qiáng)，可對(duì)混合肉類進(jìn)行鑒別和區(qū)分，即使摻雜少量異種肉，也能用PCR方法加以鑒別；PCR方法可用于熱加工的肉制品鑒別當(dāng)中，高溫過(guò)程僅僅打斷了核酸的片斷，并不會(huì)完全降解核酸，因而熱加工的肉制品當(dāng)中仍然存在可擴(kuò)增的模板，這在飼料工業(yè)肉骨粉來(lái)源的鑒別過(guò)程中得到了很好的證實(shí)；PCR反應(yīng)的迅速，結(jié)果易于觀測(cè)，使得這種檢測(cè)方法目前廣泛應(yīng)用在飼料、保健品的動(dòng)物源性成分的鑒別當(dāng)中。

PCR技術(shù)中，引物設(shè)計(jì)是PCR成功的關(guān)鍵因素，好的引物將使檢測(cè)實(shí)驗(yàn)更加快捷，結(jié)果更加清晰。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供鑒定或輔助鑒定動(dòng)物組織和/或器官的PCR引物對(duì)或引物對(duì)組合物，以及利用所述引物對(duì)或引物對(duì)組合物鑒定待測(cè)動(dòng)物組織和/或器官中是否含有或候選含有貓、豬、牛、羊、雞這五種動(dòng)物中至少一種動(dòng)物的組織和/或器官的方法。

本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定動(dòng)物組織和/或器官的PCR引物對(duì)既可為鑒定或輔助鑒定貓組織和/或器官的PCR引物對(duì)，也可為在含有鑒定或輔助鑒定貓組織和/或器官的PCR引物對(duì)的前提下，再含有鑒定或輔助鑒定貓、豬、牛、羊、雞組織和/或器官的5個(gè)PCR引物對(duì)中其余四個(gè)引物對(duì)中的全部、或任意三對(duì)、或任意兩對(duì)、或任一對(duì)形成的引物對(duì)組合物。具體分為如下五種：

1、鑒定或輔助鑒定動(dòng)物組織和/或器官的PCR引物對(duì)組合物，由獨(dú)立包裝的五個(gè)引物對(duì)組成，第一對(duì)引物是由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成的鑒定或輔助鑒定貓組織和/或器官的PCR引物對(duì)，第二對(duì)引物是由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成的鑒定或輔助鑒定豬組織和/或器官的PCR引物對(duì)，第三對(duì)引物是由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成的鑒定或輔助鑒定牛組織和/或器官的PCR引物對(duì)，第四對(duì)引物是由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA組成的鑒定或輔助鑒定羊組織和/或器官的PCR引物對(duì)，第五對(duì)引物是由序列表中序列9和序列10所示的兩條單鏈DNA組成的鑒定或輔助鑒定雞組織和/或器官的PCR引物對(duì)；所述動(dòng)物為貓、豬、牛、羊、雞中的至少一種。

2、鑒定或輔助鑒定動(dòng)物組織和/或器官的PCR引物對(duì)組合物，由獨(dú)立包裝的四個(gè)引物對(duì)組成，其中一個(gè)引物對(duì)是由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成的鑒定或輔助鑒定貓組織和/或器官的PCR引物對(duì)，另外三個(gè)引物對(duì)為下述四個(gè)引物對(duì)中的任三個(gè)：由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成的鑒定或輔助鑒定豬組織和/或器官的PCR引物對(duì)、由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成的鑒定或輔助鑒定牛組織和/或器官的PCR引物對(duì)、由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA組成的鑒定或輔助鑒定羊組織和/或器官的PCR引物對(duì)、由序列表中序列9和序列10所示的兩條單鏈DNA組成的鑒定或輔助鑒定雞組織和/或器官的PCR引物對(duì)；所述動(dòng)物為貓、豬、牛、羊、雞中的至少一種。