[發明專利]一種肝硬化競爭性酶聯免疫檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201110359482.6
• 申請日: 2011-11-14
• 公開（公告）號: CN102401831A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 魏開華;肖漢族;周曉明;付海媛;原劍;孫云波;侯利平;楊保安;黃亞娟;鄭俊杰;甄蓓;張拓;王東茂
• 申請（專利權）人: 北京正旦國際科技有限責任公司;湖南金健藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及肝硬化競爭性酶聯免疫檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

隨著肝癌外科的成熟和發展，肝癌的治療方法和手段日漸豐富，而不再局限于單一的手術治療。肝切除術和肝移植仍然是肝癌患者治療的主要方法，但微創治療、經皮肝動脈化療栓塞等技術方法，作為手術治療的重要補充，也得到了較廣泛的應用，它們在為患者創造手術治療機會、降低或減少腫瘤的復發和轉移等方面都起到了一定的作用，延長了患者的生存時間。雖然如此，肝癌患者發病隱匿、無明顯癥狀、多數患者就診時已失去手術根治的機會。因此，“早期發現、早期診斷、早期治療”是降低癌癥死亡率的重要措施。篩選和建立用于癌癥早期診斷的、高敏感、高特異的血清學診斷技術，提供癌癥早期預警普查，具有重大意義和巨大市場前景。

目前國內外廣泛采用檢測血清中甲胎蛋白(AFP)來確診肝癌(HCC)，盡管這種方法提高了HCC的檢測水平，但仍有顯著數量患者的甲胎蛋白并未升高，尤其對腫瘤直徑小于3CM的小肝癌患者，其敏感性及特異性更低。近年來，標志物聯檢在腫瘤診斷中的應用的研究得到很大的重視。如通過聯檢甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、血清鐵蛋白(SF)、α-L-巖藻糖苷酶(AFU)可顯著提高肝癌診斷的陽性率。AFP、CEA、SF、CA等四標志物聯檢原發肝癌的實驗也獲得不錯的結果。但由于診斷特異性或成本效益方面的原因，很難在肝癌普查中廣泛應用。

血清中豐富的多肽資源在目前重大疾病診斷中扮演重要的角色。采用目前常規的臨床手段進行多肽檢測逐漸引起學術界和醫藥界的高度重視，基于多肽的腫瘤診斷技術正開始向臨床應用高速發展，腫瘤的早期預警技術也在開發之中，一些多肽的聯合應用有可能為腫瘤等重大疾病的預警提供革新性的突破。血清中多肽同血清中蛋白不同，其分子量低于10000Da，結構簡單，變化多樣。是否能夠采用目前常規的臨床手段進行檢測仍在探索。

目前，檢測血清中多肽進行臨床診斷還沒有先例。血清多肽能否用于診斷或早期診斷肝癌可以從三個方面來判斷。1、血清多肽是血清蛋白的降解產物或基因直接編碼產物。當生理狀態發生變化時尤其向腫瘤轉化時，蛋白的代謝發生變化，導致多肽相應變化，從而建立了多肽----疾病的相關關系，因此，多肽可以像蛋白一樣進行疾病診斷。2、實踐上已經有一些疾病的診斷采用多肽標志物，1985年以來，利用合成多肽檢測艾滋病病毒(P24)、風疹病毒、人巨細胞病毒及類風濕等已應用到臨床。3、文獻表明，多肽可以用于臨床診斷，如，Clinical?Chemistry?51：10，1933-1945(2005)和Clinical?Chemitry?53：61，067-1074(2007)認為血清多肽標志物能更精確的區分蛋白標志物不能區分的腫瘤。Nat?Methods.2008?Jan；5(1)：57-9認為質譜診斷腫瘤甚至比MRI還好。質譜技術給生命科學帶來的促進作用舉世公認，近十年來，質譜在新生二篩查、基因突變檢測方面取得一系列重要進展，并出現了單核苷酸多態性(SNP)分析專業質譜儀器，顯示了質譜在臨床診斷方面的價值。

基于血清多肽抗原的腫瘤早期診斷試劑盒是當前最受關注的腫瘤早期診斷技術之一。目前臨床領域中單一標志物始終存在著特異性不強、陽性率較低等不足，特別是對早期腫瘤的檢測率不高，多標志聯合檢測事在必行，但苦于沒有一個很好的手段實現同時檢測。2006年Josep?Villanueva等人對32例前列腺癌、21例乳腺癌和20例膀胱癌血清多肽研究，發現14個、10個和58個可分別作為前列腺癌、乳腺癌和膀胱癌的腫瘤標志多肽，預測準確率為100％。血清中存在的豐富的多肽為腫瘤預警和早期診斷提供了豐富的標志物資源，這些多肽的聯合應用有可能為腫瘤等重大疾病的預警提供革新性突破。經研究發現，序列為Asn-Leu-Gly-His-Gly-His-Lys-His-Glu-Arg-Asp-Gln-Gly-His-Gly-His-Gln的多肽是癌癥預警重要血清多肽標志物之一，而肝硬化是肝癌的重要預警時期。因此對肝硬化的準確和快速的診斷有助于預防和早期治療肝癌。

近幾年興起的血清多肽組學已成功應用于幾種癌的診斷研究，如乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌等，主要采用的是表面增強激光解吸離子化(SELDI)技術和免疫磁珠技術，但該體系存在價格昂貴，不利推廣的缺點。

發明內容

本發明的目的在于提供保藏號為CGMCC?No.5269的單克隆抗體雜交瘤細胞株AP0105在制備肝硬化競爭性酶聯免疫試劑盒中的應用。