[發明專利]殺滅NDM-1肺炎克雷白氏菌的方法

無效

• 申請號: 201110354264.3
• 申請日: 2011-11-10
• 公開（公告）號: CN103103144A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 王興嫻
• 申請（專利權）人: 蔓妮藝能有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 鄭小粵

技術領域

本發明涉及消毒滅菌領域，特別是涉及殺滅NDM-1肺炎克雷白氏菌(NDM-1-positive?Klebsiella?pneumoniae)的方法。

背景技術

快速于世界各地散播的NDM-1(New?Delhi?Metallo-β-Iactamase)陽性病原菌已對公共衛生與臨床治療造成極大困擾與威脅，如何有效避免此類病原菌的散播并將其殺死成為首要議題。日前，于臺灣大學所發展出來的病毒崩(VirusBom)可以快速且有效地殺死不同的病原菌，包含病毒與細菌，在公共衛生防治上有其應用的潛能。因此，我們想進一步探討是否病毒崩可以有效殺死與避免NDM-1陽性病原菌的散播。

發明內容

本發明的目的之一在于提供了殺滅NDM-1肺炎克雷白氏菌的方法，其中使用病毒崩。病毒崩的濃度在300ppm至1000ppm之間。

更進一步的，病毒崩的濃度是300ppm。

本發明的另一個目的在于提供了病毒崩在殺滅NDM-1肺炎克雷白氏菌中的應用。病毒崩的濃度在300ppm至1000ppm之間。

更進一步的，病毒崩的濃度是300ppm。

根據本發明，病毒崩可以直接殺死從臺灣所分離出來的NDM-1陽性的肺炎克雷白氏菌。當300ppm的病毒崩在室溫下與此細菌直接反應，可以在短短一分鐘內快速殺死它。電子顯微鏡與熒光染色分析顯示病毒崩的毒殺機制是經由改變NDM-1肺炎克雷白氏菌的細胞壁結構而導致其死亡。實驗表明，當此細菌處在含有不同濃度病毒崩的培養液環境下培養，就算高達300ppm的病毒崩并不會明顯改變其生長，但卻可以有效地抑制其生物膜(Biofilm)的形成，甚至已經形成的生物膜在300ppm的病毒崩直接處理之后，生物膜可以有效地被瓦解。因此，從目前的結果顯示，病毒崩可以快速殺死帶有NDM-1的肺炎克雷白氏菌，并通過抑制生物膜的形成來避免此類細菌的散播與附著，因此未來有極大的潛能應用于醫院與公共場所的衛生防護。

附圖說明

圖1是表明病毒崩對NDM-1的肺炎克雷白氏菌具有毒殺作用的示意圖。

圖1A表示NDM-1的肺炎克雷白氏菌在所標示濃度的病毒崩和1％乙醇中(控制組)培養標定時間所長出的菌落；

圖1B表示NDM-1的肺炎克雷白氏菌在所標示濃度的病毒崩和1％乙醇中(控制組)培養標定時間后存活的細菌數(CFU/ml)，ND表示未偵測到菌落數；

圖1C顯示通過掃描式電子顯微鏡觀察NDM-1的肺炎克雷白氏菌在LB，控制組或300ppm病毒崩中生長狀況；

圖1D顯示經LIVE/DEAD?BacLight?Kits(Invitrogen)染色后，利用正立熒光顯微鏡(Leica，Germany)觀察NDM-1的肺炎克雷白氏菌在LB，控制組或300ppm病毒崩中死活比例；

圖2是表明病毒崩抑制具有NDM-1的肺炎克雷白氏菌的生物膜的形成的示意圖；

圖2A表示利用分光光度計測定630nm的吸光值(OD₆₃₀)用于定量分析生物膜；

圖2B表示利用分光光度計測定測定OD₆₀₀的吸光值用于表示細菌生長密度；

圖2C表示利用分光光度計測定測定630nm的吸光值(OD₆₃₀)用于定量分析NDM-1的肺炎克雷白氏菌在未處理組，控制組和病毒崩組中的生物膜。

具體實施方式

1.方法與材料

細菌菌株與培養條件

帶有NDM-1的肺炎克雷白氏菌是從第一個在臺灣疾病管制局(Taiwan?CDC)所報導案例的38歲臺灣男子所分離出來的(Wu?et?al.)。一般肺炎克雷白氏菌的培養是接種單一菌落在Luria?Broth(LB，Difco，LB培養基)培養液中，然后在37℃隔夜振蕩培養。為了獲取快速生長期階段的細菌，將隔夜培養菌液1∶100稀釋于新的LB培養液中，震蕩培養至細菌密度在600nm吸光值(OD600)約在0.3至0.5左右，通過離心方式(8000rpm、10min)收集此階段的細菌。經過無菌的phosphate?buffer?saline(磷酸鹽緩沖液，PBS，pH7.4)洗滌1次后，回溶在所指定的溶液中進行下階段的實驗。

化學藥品