[發明專利]磺胺二甲嘧啶酶聯免疫檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201110352253.1
• 申請日: 2011-12-05
• 公開（公告）號: CN102507945A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 李君華;吳萌;李春生;程華;閆靜輝;齊穎穎
• 申請（專利權）人: 河北省科學院生物研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/31
• 代理公司: 石家莊新世紀專利商標事務所有限公司 13100
• 代理人: 張素靜

技術領域

本發明涉及一種磺胺二甲嘧啶酶聯免疫檢測試劑盒。

技術背景

磺胺二甲嘧啶(Sμlfamethazine??SM2?)，作為磺胺類藥物的一種，其性質穩定、抑菌譜廣、毒性小、口服易吸收且價格低廉，是畜牧業上應用最廣泛、應用量最大的藥物之一。但是由于它在體內的作用時間和代謝時間較長，易殘留在動物體內，通過任何途徑都可能在人體中蓄積。藥物蓄積濃度超過一定值對人體機能是有害的，長期蓄積則會導致磺胺藥抗藥性的產生，造成耐藥菌的流行性感染，且有潛在的致癌性。因此，歐盟對牛奶和肉類食品中的磺胺類藥物制定了最高允許值，即磺胺類藥物總量不得超過100μg/?kg，單個磺胺類藥物的濃度不得超過25μg/?kg。2002年12月我國農業部公告第235號文件規定在所有食品動物的肌肉、脂肪、肝和腎中磺胺類最高殘留限量100μg/kg，并將磺胺二甲嘧啶列作為重點監控的對象。

目前，檢測SM2的方法有微生物法，物理化學法，如高壓液相色譜(HPLC)?、氣-?液色譜(GLC)?、質譜(MS)?、薄層色譜法(TLC)?等，微生物法檢測速度較快,但對磺胺藥缺乏靈敏性和特異性，物理化學法則存在前處理繁瑣，需要昂貴儀器及其專業操作等特點，檢測大批樣本較為困難，不利于大范圍的推廣應用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種操作簡便、快速、適合大批量樣品初篩的磺胺二甲嘧啶酶聯免疫檢測試劑盒。

本發明解決上述技術問題采取的技術方案：

一種磺胺二甲嘧啶酶聯免疫檢測試劑盒，有一盒體，所述盒體中包括：

（1）包被有磺胺二甲嘧啶抗原的酶標板；

?（2）磺胺二甲嘧啶特異性抗體；

?（3）酶標記物；

?（4）磺胺二甲嘧啶標準品溶液；

?（5）A底物顯色液和B底物顯色液；

?（6）終止液；

?（7）濃縮洗滌液；

?（8）濃縮復溶液；

?（9）濃縮提取液。

所述磺胺二甲嘧啶抗原由磺胺二甲嘧啶半抗原和載體蛋白通過重氮化法偶聯得到，所述載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白、兔血清蛋白或鼠血清蛋白。

所述磺胺二甲嘧啶特異性抗體為由所述磺胺二甲嘧啶抗原按常規的免疫方法制備得到單克隆抗體或多克隆抗體，其工作液為pH7.4的含有0.1-5%（w/w）脫脂奶粉的磷酸緩沖液，磺胺二甲嘧啶特異性抗體與上述工作液的比為1:2000（w/w）。

所述酶標記物為酶標記的抗鼠或抗兔的抗抗體，其工作液為pH7.4的含有0.1-5%脫脂奶粉的磷酸緩沖液，酶標記物與上述工作液的比為1:4000（w/w），標記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酯酶。

所述磺胺二甲嘧啶標準品溶液濃度分別為0μg/L、0.5?μg/L、1.5?μg/L、4.5?μg/L、13.5?μg/L、40.5?μg/L。

所述A底物為0.06%（w/w）的過氧化氫，?B底物為0.4%（w/w）四甲基聯苯胺。

所述濃縮提取液為NaOH?濃度為0.1M，pH10的磷酸緩沖液，所述濃縮復溶液為含0.1%-0.6%（w/w）DMSO的磷酸鹽緩沖液，所述濃縮洗滌液為0.9%（w/w）的NaCl溶液，所述終止液為2N的硫酸溶液。

本發明磺胺二甲嘧啶酶聯免疫檢測試劑盒的有益效果是：本發明的檢測磺胺二甲嘧啶殘留的酶聯免疫試劑盒采用的是直接競爭ELISA法，克服了其他試劑盒操作時間長、前處理復雜的問題，整個操作過程只需30min，前處理無需配備特殊的儀器，操作簡單、快速，適合現場大批量篩查，且試劑盒各試劑均是工作液形式，操作簡單易行。

附圖說明

圖1為磺胺二甲嘧啶標準曲線圖。

具體實施方式

一種磺胺二甲嘧啶酶聯免疫檢測試劑盒，有一盒體，所述盒體中包括：

（1）包被有磺胺二甲嘧啶抗原的酶標板；

（2）磺胺二甲嘧啶特異性抗體；

（3）酶標記物；

（4）磺胺二甲嘧啶標準品溶液；

（5）A底物顯色液和B底物顯色液；

（6）終止液；

（7）濃縮洗滌液；

（8）濃縮復溶液；

（9）濃縮提取液。

一、本發明試劑盒的制備過程如下：

1、制備包被有磺胺二甲嘧啶包被原的酶標板