[發明專利]醋酸卡培立肽的制備方法

有效

• 申請號: 201110347965.4
• 申請日: 2011-11-07
• 公開（公告）號: CN102382188A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發明（設計）人: 張文治;付信;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/58
• 分類號: C07K14/58;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所 44248
• 代理人: 韓英杰

1.一種醋酸卡培立肽的制備方法，包括以下步驟：

由Fmoc-Tyr(tBu)-OH和替代度為0.5mmol/g?-1.0mmol/g的Wang?Resin反應，得到Fmoc-Tyr(tBu)-Wang?Resin；

將Fmoc-Tyr(tBu)-Wang?Resin樹脂采用逐一偶聯的方式合成得到線性卡培立肽-?Wang?Resin；

3）采用固相氧化法氧化卡培立肽-?Wang?Resin；

4）采用TFA裂解，得到粗肽；

5）高效液相純化卡培立肽，包括以下步驟：

第一步純化：將合成所得粗肽溶解后用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以磷酸鹽緩沖溶液為A?相、色譜純乙腈為B相，進行梯度洗脫純化；

第二步轉鹽：采用RP-HPLC法將其轉成醋酸鹽。

2.根據權利要求1所述的醋酸卡培立肽的制備方法，其特征在于：所述步驟2）逐一偶聯采用偶聯劑，偶聯劑包括TEA、NMM或DIPEA。

3.根據權利要求1所述的醋酸卡培立肽的制備方法，其特征在于：所述采用碘固相氧化合成卡培立肽-?Wang?Resin時，碘的用量以物質量計，是卡培立肽-?Wang?Resin物質量的10-80倍，氧化時間是4-16小時。

4.根據權利要求2所述的醋酸卡培立肽的制備方法，其特征在于：所述采用碘固相氧化合成卡培立肽-?Wang?Resin時，碘的用量以物質量計，是卡培立肽-?Wang?Resin物質量的10-80倍，氧化時間是4-16小時。

5.根據權利要求1-4任意一項所述的醋酸卡培立肽的制備方法，其特征在于：步驟5）第一步純化：以磷酸鹽緩沖溶液為A?相，緩沖溶液pH范圍為2.5-3.5；以色譜純乙腈為B相，B相的梯度為：17%～32%，進行梯度洗脫純化45-120min。

6.根據權利要求1-4任意一項所述的醋酸卡培立肽的制備方法，其特征在于：步驟5）第二步RP-HPLC法為：以濃度為0.05--0.1%醋酸鹽緩沖溶液作為A?相；緩沖溶液pH為3.5～4.4；以色譜純乙腈作為B相，梯度為：6%～36%，梯度洗脫時間為30-90?min，轉成醋酸鹽。

7.根據權利要求5任意一項所述的醋酸卡培立肽的制備方法，其特征在于：步驟5）第二步RP-HPLC法為：以濃度為0.05--0.1%醋酸鹽緩沖溶液作為A?相；緩沖溶液pH為3.5～4.4；以色譜純乙腈作為B相，梯度為：6%～36%，梯度洗脫時間為30-90?min，轉成醋酸鹽。