[發明專利]穩定的乳酸測定液體試劑盒

有效

• 申請號: 201110347210.4
• 申請日: 2011-11-07
• 公開（公告）號: CN102507915A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 鄒炳德;沃燕波
• 申請（專利權）人: 寧波美康生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 代忠炯

技術領域

本發明屬于醫學檢驗測定技術領域，具體涉及一種穩定的乳酸測定液體試劑盒。

背景技術

乳酸是糖代謝的中間產物，主要來源于骨骼肌、腦、皮膚、腎髓質和紅細胞等，血液中乳酸濃度與這些組織產生乳酸的速率以及肝臟對乳酸的代謝速度有關，約65％的乳酸由肝臟利用，而肝外乳酸通過骨骼肌和腎皮質的氧化作用清除。一般認為乳酸濃度超過5?mmol/L以及pH值小于7.25時提示有明顯的乳酸中毒。乳酸中毒在下列兩類臨床情況下發生：A型(缺氧型)：常見，與組織氧合作用降低有關，如休克、低血容量和左心室衰竭；B型：與某些疾病(如糖尿病、腫瘤、肝病)、藥物或毒物如乙醇、甲醇、水楊酸或先天代謝紊亂(如甲基丙二酸血癥，丙酮酸血癥和脂肪酸氧化缺陷)有關。乳酸中毒比較常見，住院患者發生率約1％。其所致死亡率超過60％，如同時存在低血壓，則死亡率接近100％。

現在普遍使用的測定血液中乳酸的方法為比色法，該法是利用乳酸脫氫酶催化L-乳酸和輔酶生成丙酮酸和還原型輔酶，并加入硫酸肼捕獲丙酮酸使反應完成，生成的還原型輔酶與乳酸等摩爾，通過測定還原型輔酶來計算乳酸含量。由于肼易與空氣中的二氧化碳發生反應生成肼基甲酸，因而此法試劑開瓶穩定性較差，試劑開瓶后由于吸收空氣中的二氧化碳很快就會導致試劑pH值下降，影響測定的準確度及試劑的穩定性。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供一種準確度、精密度均較好，開瓶穩定性好，2～8℃開瓶保存至少可穩定?15天，能滿足臨床檢驗要求的開瓶穩定的乳酸測定液體試劑盒。

為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案為：一種穩定的乳酸測定液體試劑盒，該試劑盒為由試劑1和試劑2組成的液體型雙試劑，其中

試劑1各組分及濃度為：

緩沖液(pH?5.5-6.5)????????????????0.05~0.5?M?（mol/L）

α/β-萘酚（α-萘酚或β-萘酚）?????20~200?mg/L

輔酶????????????????????????????20~200?mg/L

防腐劑???????????????????????????0.1~10?g/L；

試劑2各組分及濃度為：

緩沖液(pH?8.5-9.5)????????????????0.05~0.5?M

乳酸脫氫酶???????????????????????20~200?KU/L

穩定劑???????????????????????????0.1~100?g/L

防腐劑???????????????????????????0.1~10?g/L。

本發明上述試劑1中的緩沖液為檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液、咪唑緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液等中的一種，優選檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液。

本發明上述試劑1中的輔酶為NAD（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸），NADP（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，又稱輔酶II），thio-NAD（硫代氧化型輔酶I）等中的一種。

本發明上述試劑2中的緩沖液為三羥甲基氨基甲烷緩沖液、3-三羥甲基甲胺-2-羥基丙磺酸緩沖液、哌嗪-1,4-二乙磺酸緩沖液等中的一種，優選三羥甲基氨基甲烷緩沖液。

本發明上述試劑2中的穩定劑為乙二醇、丙三醇、牛血清白蛋白、海藻糖等中的一種。

本發明的防腐劑為疊氮鈉或proclin系列防腐劑（如Proclin300）等。

本發明試劑1和試劑2的配制方法為常規方法，即按照上述配方比例，分別將試劑1和試劑2所述的各組分分別加入蒸餾水后各自混合攪勻即可。

本發明試劑測定樣本中乳酸的測試條件如下：溫度：30-37?℃；比色杯光徑為1.0?cm。檢測主波長340?nm，副波長405?nm。

應用本發明乳酸測定試劑測定樣本中乳酸的方法如下：樣品（校準管以校準品做樣品）加試劑1混勻，30-37℃孵育3-5?min后讀取吸光度A0，立即加入試劑2混勻，30-37℃反應5?min后，讀取吸光度A1，ΔA＝A1-A0。其中樣本用量3?μl，試劑1用量200?μl，試劑2?用量50?μl。?????

本發明試劑盒測定樣本中LAC含量按以下公式進行計算：???

本發明的優點和有益效果：