[發(fā)明專利]PIK3CA基因驅(qū)動突變的檢測探針、引物及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110344347.4
• 申請日: 2011-11-03
• 公開（公告）號: CN102453765A
• 公開（公告）日: 2012-05-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 江風(fēng)閣;張海龍;阮力;鄭立謀
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門艾德生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭

1.用于檢測PIK3CA基因突變的引物及探針，包括下列6組18條引物和探針：

(1)PIK3CA驅(qū)動突變特異性引物和雙環(huán)探針核苷酸序列：其序列為SEQ?ID?NO：1至SEQ?ID?NO?18。

2.一種檢測PIK3CA基因突變的檢測試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的6組18條引物和探針。

3.如權(quán)利要求2所述的檢測PIK3CA基因突變的檢測試劑盒，包括如下的熒光PCR的反應(yīng)體系，PIK3CA驅(qū)動突變熒光PCR反應(yīng)體系：

4.如權(quán)利要求2所述的PIK3CA基因突變檢測試劑盒的檢測方法，包括以下步驟：

(1)提供權(quán)利要求1所述的6組18條引物和探針；

(2)待測樣品的處理和模板DNA的提??；

(3)配制熒光PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系；

(4)用步驟(1)的引物和探針擴(kuò)增待測驅(qū)動性基因突變靶序列；

(5)利用雙環(huán)探針與特異性引物的雜交，檢測反應(yīng)體系的FAM和HEX熒光強(qiáng)度，以HEX信號達(dá)到設(shè)定閾值(Ct＞18)是表明上樣DNA的量在允許范圍內(nèi)，F(xiàn)AM信號結(jié)果可信；以FAM達(dá)到設(shè)定的閾值時所需要的循環(huán)次數(shù)Ct值作為陰陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，Ct值為0或31：陰性；Ct值小于31：陽性。

5.如權(quán)利要求4所述的一種PIK3CA基因突變檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于：步驟(2)所述的待檢測樣品包括手術(shù)切除的新鮮病理組織，石蠟包埋病理組織，石蠟切片，全血，血漿，血清和胸腔積液。

6.一種用于檢測PIK3CA基因突變的引物及探針，其特征在于，其由SEQ?ID?NO：1～SEQ?ID?NO：18的寡核苷酸引物和探針或與其有至少70％同一性的寡核苷酸引物序列組成。