[發明專利]用于檢測小鼠白血病病毒的引物、探針及其方法

有效

• 申請號: 201110340743.X
• 申請日: 2011-11-02
• 公開（公告）號: CN102337359A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 譚淑萍;李萃;王剛;蔣立新;周志文
• 申請（專利權）人: 舒泰神（北京）生物制藥股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.用于檢測小鼠白血病病毒的引物，其特征在于，所述引物是由具有序列表中的SEQ?ID?NO：1的上游引物與具有序列表中的SEQ?ID?NO：2的下游引物組成的一對寡核苷酸。

2.一種與權利要求1所述引物配合使用的探針，其特征在于，所述探針具有序列表中的SEQ?ID?NO：3的核苷酸序列。

3.根據權利要求2所述的探針，其特征在于，所述探針5’端連接有熒光報告基團，3’端連接有熒光淬滅基團。

4.根據權利要求3所述的探針，其特征在于，所述熒光報告基團選自FAM、VIC、JOE、HEX中的任意一種，所述熒光淬滅基團選自TAMRA或Eclipse。

5.根據權利要求3所述的探針，其特征在于，所述熒光報告基團為FAM，所述熒光淬滅基團為TAMRA。

6.一種用于檢測小鼠白血病病毒的方法，其特征在于，所述方法使用權利要求1中所述的引物及權利要求2～5任一所述的探針進行實時熒光定量PCR檢測。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR的反應體系還包括RT-PCR擴增試劑、陽性RNA標準品、酵母tRNA稀釋液、陰性質控品、空白對照。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR的退火溫度為60℃。

9.根據權利要求6～8任一所述的方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR的反應條件為：48℃，15min；95℃，10min；95℃，15sec，60℃，40sec，共40個循環。

10.根據權利要求6～9任一所述的方法，其特征在于，所述方法還包括標準曲線的建立，方法為：擴增含序列表中SEQ?ID?NO：4所示的堿基同源序列的pMD18-T載體，得到500bp的DNA片段，體外轉錄所述DNA片段并純化獲得的RNA作為陽性RNA標準品，將其十倍稀釋成不同濃度的陽性定量標準品，以所述陽性定量標準品作為模板進行實時熒光定量PCR檢測，得到檢測小鼠白血病病毒的標準曲線。

11.一種檢測小鼠白血病病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有權利要求1中所述的引物及權利要求2～5任一所述的探針。

12.根據權利要求11所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應體系還包括RT-PCR擴增試劑、陽性RNA標準品、酵母tRNA稀釋液、陰性質控品、空白對照。

13.根據權利要求12所述的試劑盒，其特征在于，所述RT-PCR擴增試劑為2×Taqman?PCR?Mix、40×Taqman?RT-Enzyme?MIX。

14.根據權利要求12或13所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性RNA標準品通過下述方法獲得：擴增含序列表中SEQ?ID?NO：4所示的堿基同源序列的pMD18-T載體，得到500bp的DNA片段，體外轉錄所述DNA片段并純化獲得的RNA即標準品。

15.權利要求1中所述的引物或權利要求2～5任一所述的探針在檢測鼠源生物制品中白血病病毒殘留時的應用。