[發明專利]一種單克隆抗體mcf2及其應用

無效

• 申請號: 201110335959.7
• 申請日: 2011-10-28
• 公開（公告）號: CN102358895A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發明（設計）人: 楊笛;卞智萍;陳相健;徐晉妉;吳恒芳;顧春榮
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;C07K14/47;C07K1/22;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

技術領域

本發明屬于生物醫學領域，涉及一株單克隆抗體mcf2及其應用，具體涉及心臟型脂肪酸結合蛋白單克隆抗體mcf2及其應用。?

背景技術

脂肪酸結合蛋白(FABPs)是一組多源性的小分子細胞內蛋白質，分子量為12～16KDa，廣泛分布于哺乳動物的小腸、肝、脂肪、心、腦、骨骼肌等多種細胞中。有小腸型(I-FABP)、心肌型(H-FABP)、肝臟型(L-FABP)、腎臟型(K-FABP)等亞型。不同型FABP的序列有較大的同源性。心臟型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)分子量為14～15KDa，等電點(PI)為5.1，可將脂肪酸從細胞質膜向發生酯化和氧化的部位運輸，從而進入線粒體的能量代謝體系之中，使脂肪酸在此氧化分解并最終生成三磷酸腺苷(ATP)，為心肌收縮提供能量。人H-FABP由132個氨基酸殘基組成，在心肌中含量豐富，約占心臟全部可溶性蛋白的4％～8％，每克濕重心肌中含H-FABP約(0.52±0.06)mg。正常人的血漿和尿中不含有H-FABP或含量甚少。當心肌細胞受損時可快速釋放到血和尿中。由于各型FABP具有各自特異的抗原決定簇，可以通過免疫學方法將H-FABP與其他型FABP相區分。隨著FABP測定方法的研究和臨床的應用，H-FABP已成為早期心肌損傷診斷的標志物(中國實驗診斷學，2005年2月第9卷第1期)。?

發明內容

本發明的目的是提供分泌心臟型脂肪酸結合蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株。?

本發明的另一目的是提供心臟型脂肪酸結合蛋白單克隆抗體。?

本發明的又一目的是提供心臟型脂肪酸結合蛋白單克隆抗體的應用。?

一株分泌心臟型脂肪酸結合蛋白的雜交瘤細胞株MCF2，與2011年9月6日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC?NO：C201181。?

所述的保藏號為CCTCC?NO：C201181的雜交瘤細胞株MCF2分泌的抗人心臟型脂肪酸結合蛋白單克隆抗體mcf2。?

所述的保藏號為CCTCC?NO：C201181的雜交瘤細胞株MCF2分泌的抗人心臟型脂肪酸結合蛋白單克隆抗體mcf2在檢測或純化人心臟型脂肪酸結合蛋白中的應用。?

所述的保藏號為CCTCC?NO：C201181的雜交瘤細胞株MCF2分泌的抗人心臟型脂肪酸?結合蛋白單克隆抗體mcf2在制備人心臟型脂肪酸結合蛋白檢測試劑中的應用。?

所述的人心臟型脂肪酸結合蛋白檢測試劑優選檢測檢測人心臟型脂肪酸結合蛋白的Western?Blot試劑、ELISA檢測試劑、膠體金檢測試劑。?

本發明的有益效果：?

本發明利用純化的人H-FABP(心臟型脂肪酸結合蛋白)作為免疫原，經過皮下免疫、常規細胞融合、篩選及克隆化，獲得了一株能夠穩定分泌抗H-FABP單克隆抗體的雜交瘤細胞株MCF2(CCTCC?NO：C201181)。經ELISA、免疫印跡等方法鑒定，該雜交瘤細胞所分泌的單克隆抗體能夠特異性識別H-FABP(Hytest公司)，效價高、特異性強。?

本發明H-FABP單克隆抗體的應用如下：?

(1)應用該抗體可Western?Blot檢測心肌組織的H-FABP表達。?

(2)應用該抗體可建立金標試劑盒快速檢測各種體液如血液、血漿、血清、尿的H-FABP的水平。?

(3)應用該抗體可建立ELISA檢測試劑盒定量檢測各種體液如血液、血漿、血清、尿的H-FABP的水平。?

(4)應用該抗體制備免疫親和層析柱，來分離純化H-FABP蛋白。?

(5)應用該抗體進行免疫組化檢測心肌組織中H-FABP蛋白表達量。?

本發明還進一步確認了所述的單克隆抗體在體外用于檢測體液或組織中H-FABP的表達。例如用于檢測各種體液如血液、血漿、血清及尿液的H-FABP的水平；還可以測定各種疾病如急性心肌梗死等急性心肌損傷疾病H-FABP的表達水平，作為臨床診斷或輔助診斷的一個標志物。本發明制得的人H-FABP單克隆抗體mcf2，為H-FABP的基礎研究和臨床研究提供了有利的工具。?

附圖說明：

圖1心肌粗提液Sephadex?G75凝膠過濾柱層析洗脫曲線。?

圖2心肌粗提液Sephadex?G75經凝膠過濾柱層析后各組分(Tricine)-SDS-PAGE電泳。?

A：第36號管開始于M15000附近出現清晰蛋白條帶；?