[發明專利]一種構建重組質粒的方法有效
| 申請號： | 201110330257.X | 申請日： | 2011-10-26 |
| 公開（公告）號： | CN102358906A | 公開（公告）日： | 2012-02-22 |
| 發明（設計）人： | 查向東 | 申請（專利權）人： | 廣東希普生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/66 | 分類號： | C12N15/66 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 510080 廣東省廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 構建 重組 質粒 方法 | ||
1.一種構建重組質粒的方法，其特征在于，依次包括下述步驟：
1)采用聚合酶鏈式反應對至少兩個DNA基因進行擴增，得到對應的末端帶限制性內切 酶識別和切割位點的PCR產物；
2)采用連接酶對步驟1)所得的PCR產物進行平末端連接；
3)將步驟2)所得的連接產物雙酶切，檢測，回收獲取目的片段；
4)將步驟3)所得的目的片段與雙酶切后的載體質粒連接，獲得重組質粒。
2.根據權利要求1所述的一種構建重組質粒的方法，其特征在于，所述的聚合酶鏈式反 應采用的酶為Pfu?DNA聚合酶或其它擴增結果為平末端的高溫DNA聚合酶。
3.根據權利要求1所述的一種構建重組質粒的方法，其特征在于，所述的檢測是采用 0.5～1.5％瓊脂糖電泳檢測。
4.根據權利要求1所述的一種構建重組質粒的方法，其特征在于，步驟2)所述的連接 酶為T4?DNA連接酶。
5.根據權利要求1所述的一種構建重組質粒的方法，其特征在于，對步驟2)獲得連接 產物可進一步用Pfu?DNA聚合酶進行PCR強化擴增；
6.根據權利要求1所述的一種構建重組質粒的方法，其特征在于，步驟3)所述的雙酶為 Nco?I和EcoR?I或其它限制性內切酶。
7.根據權利要求1所述的一種構建重組質粒的方法，其特征在于，步驟3)所述的載體 質粒線性化的載體質粒。
8.根據權利要求1所述的一種構建重組質粒的方法，其特征在于，步驟2)所述的目的 片段是用瓊脂糖凝膠電泳分離水解產物，回收大小相同的目標片段。
9.根據權利要求1所述的一種構建重組質粒的方法，其特征在于，步驟3)是將所得的 目的片段與雙酶切后的線性化的載體質粒連接，獲得重組質粒。
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