[發(fā)明專利]一種治療腫瘤的蛋白質(zhì)

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110319633.5
• 申請日: 2011-10-09
• 公開（公告）號: CN102443586A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張愛聯(lián);羅進(jìn)賢;張?zhí)碓?/a>;沈錦城;張澤華;劉振旺
• 申請（專利權(quán)）人: 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所;海南金寶正誠礦業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/435;A61K38/17;A61P35/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)，具體涉及一種用于治療腫瘤的蛋白質(zhì)。

背景技術(shù)

腫瘤是威脅人類健康的最主要原因之一。腫瘤的發(fā)病率和死亡率均是每年在世界范圍造成死亡人數(shù)較高的疾病，至今尚沒有特效的治療方法。目前有多種治療腫瘤的方法，而手術(shù)、放療和化療是最常用的方法。然而，手術(shù)后的腫瘤常常復(fù)發(fā)；而放療和化療不僅殺傷腫瘤細(xì)胞，也同時(shí)殺傷機(jī)體的正常細(xì)胞，副作用甚大。尋找低性和高療效的抗癌藥物一直是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)。固體腫瘤的發(fā)展需要血管而為腫瘤提供營養(yǎng)。如果抑制腫瘤的血管新生，那么將能餓死腫瘤。血管生成抑制因子是一類抑制血管生成的蛋白質(zhì)，血管生成抑制因子抗癌的臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，血管生成抑制因子對人體無毒性或毒性輕微。研究血管生成抑制因子抗癌是當(dāng)前抗癌研究的熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種治療腫瘤的蛋白質(zhì)，這種蛋白質(zhì)具有抑制血管新生的功能，具有血管生成抑制因子的特性。是通過DNA序列合成方法合成一段DNA序列，將這段DNA序列重組于畢赤酵母中表達(dá)，并將表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化，表達(dá)產(chǎn)物活性分析證明，所合成基因編碼的蛋白具有抑制血管新生和抑制腫瘤發(fā)展的生物學(xué)活性。其核苷酸序列和它的氨基酸序列如序列表中所述。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)：

1.DNA序列的合成

設(shè)計(jì)如下DNA序列，并用套疊PCR方法進(jìn)行其序列合成。將其序列命名為scl。

ATGCACGGAGACTCAGAATACAACATCATGTTTGGTCCCGACATCTGTGGCCCTGGCACCAAGAAGGTTCATGTCATCTTCAACTACAAGGGCAAGAACGTGCTGATCAACAAGGACATCCGTTGCAAGGATGATGAGTTTACACACCTTACACTGATTGTGCGGCCAGACAACCATCATCATCATCATCATTAG

2.DNA序列編碼蛋白功能的證明

(1)DNA序列重組于酵母中表達(dá)

通過DNA內(nèi)切酶和T4DNA連接酶的作用，將以上合成的DNA片段插入畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9K的多克隆位點(diǎn)，將其表達(dá)載體命名為pPIC9K-scl(附圖1)。用電轉(zhuǎn)法將pPIC9K-scl轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115，獲得工程菌GS115(pPIC9K-scl)。用BMGY-BMMY發(fā)酵GS115(pPICP9K-scl)誘導(dǎo)表達(dá)Scl蛋白。

(2)表達(dá)產(chǎn)物活性分析

發(fā)酵液上清過Ni-Agarose?His標(biāo)簽蛋白純化柱進(jìn)行純化(附圖2)，收獲的含目標(biāo)蛋白的液體經(jīng)過抽濾除鹽后，進(jìn)行抑制雞胚絨毛尿囊膜血管生成試驗(yàn)和治療實(shí)驗(yàn)小鼠黑色素瘤模型試驗(yàn)。結(jié)果是Scl蛋白抑制雞胚絨毛尿囊新生血管生成，其對雞胚絨毛尿囊膜血管生成的抑制作用強(qiáng)于Angiostatin(附圖3)，顯著地抑制實(shí)驗(yàn)小鼠腫瘤在機(jī)體內(nèi)的發(fā)展(附圖4)，具有治療腫瘤的作用。利用上述蛋白質(zhì)制備藥物，可用于治療腫瘤，是一種治療腫瘤的藥物。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明人工合成scl基因，將scl基因重組于畢赤酵母基因組進(jìn)行表達(dá)獲得的Scl蛋白，將表達(dá)產(chǎn)物純化后獲得的Scl蛋白能有效地抑制雞胚絨毛尿囊膜血管新生，具有治療腫瘤的功能。血管生成抑制因子在通過抑制腫瘤的血管新生而治療腫瘤中有著重要的用途。雖然已發(fā)現(xiàn)的血管生成抑制因子有多種，但是本發(fā)明的血管生成抑制因子基因序列小，分子量小的藥物有利于在機(jī)體內(nèi)的傳輸，并且Scl蛋白抑制血管生成的作用較強(qiáng)。為生產(chǎn)特效的治療腫瘤的藥物的研究和開發(fā)應(yīng)用創(chuàng)造了必要的條件，具有重要的理論和實(shí)踐意義。

附圖說明

附圖1.構(gòu)建含scl基因的畢赤酵母表達(dá)載體

附圖2.純化重組Scl蛋白

M.蛋白Marker；1.純化的重組Scl蛋白。

附圖3.Scl蛋白抑制雞胚絨毛尿囊膜新血管生成試驗(yàn)

A.PBS；B.Scl蛋白(20μg)；C.Angiostatin蛋白(20μg)

附圖4.Scl蛋白治療試驗(yàn)小鼠腫瘤

a.PBS；b.Scl蛋白

具體實(shí)施方式

1.DNA序列的合成

(1)設(shè)計(jì)如下DNA序列。