[發明專利]一種用金磁微粒純化植物組織基因組DNA的方法

有效

• 申請號: 201110315771.6
• 申請日: 2011-10-17
• 公開（公告）號: CN102344921A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 崔亞麗;魏旭旭;晁旭;張景閣;趙穩操;李譚杰
• 申請（專利權）人: 西安金磁納米生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司 61211
• 代理人: 徐平

1.一種用金磁微粒純化植物組織基因組DNA的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1)制備含有基因組DNA的樣品裂解液

取植物組織樣本，依次加入100～800μl的兩種裂解液，其中第一種裂解液中含有質量體積比為2％～5％聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、2％～5％十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)和體積分數為0.5％～2％β-巰基乙醇，第二種裂解液中含有3～6M鹽酸胍、體積分數為2％～5％Triton?X-100；混勻后于水浴中充分裂解5～30min，再加入10～50μl的10mg/ml?RNase溶液，得到含有基因組DNA的樣品裂解液；

2)用氯仿抽提后離心

用0.6ml～1.2ml氯仿在所述樣品裂解液中進行樣本抽提，然后8000rpm～13000rpm離心5min，得到含有基因組DNA的上清；

3)結合

取400～1000μg金磁微粒與含有基因組DNA的上清混合，在結合緩沖液的作用下，形成含有金磁微粒-基因組DNA復合物的溶液；

4)清洗

對含有金磁微粒-基因組DNA復合物的溶液進行磁性分離，棄去上清液，再加入清洗液混勻，磁性分離，棄上清，得到金磁微粒-基因組DNA復合物；

5)洗脫

將洗脫液與金磁微粒-基因組DNA復合物混勻，使基因組DNA從金磁微粒上轉到洗脫液中，磁性分離直至上清澄清，收集上清液，所得上清液即為純化得到的基因組DNA溶液。

2.根據權利要求1所述的用金磁微粒純化植物組織基因組DNA的方法，其特征在于：步驟1)中所述第一種裂解液中含有質量體積濃度為2％～5％聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、2％～5％十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)和體積分數為0.5％～2％β-巰基乙醇，第二種裂解液中含有3～6M鹽酸胍、體積分數為2％～5％Triton?X-100以及0.005～0.01M乙二胺四乙酸(EDTA)、0.5～2M?NaCl和0.05～0.2M?Tris-HCl。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟3)中的結合緩沖液是聚乙二醇與氯化鈉的混合溶液，其中氯化鈉的終濃度為1M～3M，聚乙二醇(PEG)的分子量在6000～10000之間，濃度為10％～30％。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟5)中所述洗脫液是含有10mM?Tris-HCl和1mM?EDTA、pH＝8.0的TE溶液或無核酶水。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：步驟2)采用氯仿只進行一次樣本抽提。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：步驟4)中所述清洗液是50％～85％的乙醇。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：步驟1)中所述水浴的溫度為50～65℃。