[發(fā)明專利]一種水生雙順反子病毒的RT-PCR檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110315727.5
• 申請日: 2011-10-18
• 公開（公告）號: CN102329896A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘曉藝;沈錦玉;袁雪梅;藺凌云;郝貴杰;姚嘉赟;徐洋;尹文林
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省淡水水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所 33213
• 代理人: 吳秉中

1.一種水生雙順反子病毒的RT-PCR檢測方法，其特征在于包括以下步驟：1）用水生雙順反子病毒特異性引物P0對待測RNA樣品進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA第一鏈，cDNA用水生雙順反子病毒通用引物組P1/P0進(jìn)行PCR擴(kuò)增；2）上述得到的擴(kuò)增產(chǎn)物用電泳鑒定；

所述的水生雙順反子病毒特異性引物P0為：5'-TACTCCACATRCACATATCTTC-3'；

所述的水生雙順反子病毒通用引物組P1/P0中：上游引物P1為5’-?GTKTATTCKTATGATTGGWC-3',下游引物P0為5’-TACTCCACATRCACATATCTTC-3'。

2.如權(quán)利要求1所述的一種水生雙順反子病毒的RT-PCR檢測方法，其特征在于所述的步驟1）中逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件為：37℃反應(yīng)60min，90℃?5min終止反應(yīng)，置冰上冷卻5min，得到cDNA第一鏈。

3.如權(quán)利要求1所述的一種水生雙順反子病毒的RT-PCR檢測方法，其特征在于所述的步驟1）中PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性3min，94℃變性40s,?50℃復(fù)性40s，72℃延伸l?min，循環(huán)35次，最后72℃延伸10min。

4.如權(quán)利要求1所述的一種水生雙順反子病毒的RT-PCR檢測方法，其特征在于所述的步驟1）中當(dāng)待測RNA樣品所含病毒RNA量過低而未檢出時(shí)，再以PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，采用水生雙順反子病毒通用引物組P2/P3進(jìn)行套式PCR；?

所述的水生雙順反子病毒通用引物組P2/P3中：上游引物P2為5’-?GRWGATGATGMRGARAATGGT-3',下游引物P3為5’-RAACCACTCACWMACYTTATC-3'。

5.如權(quán)利要求4所述的一種水生雙順反子病毒的RT-PCR檢測方法，其特征在于所述的套式PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性3min，94℃變性40s,?52℃復(fù)性40s，72℃延伸l?min，循環(huán)35次，最后72℃延伸10min。