[發(fā)明專利]檢測病源細(xì)胞的靶向性分子及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110315281.6
• 申請日: 2011-10-17
• 公開（公告）號: CN103045720A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何偉;楊國華;呂娟;韓寧寧;李英輝;郭志偉
• 申請（專利權(quán)）人: 格諾思博生物科技(上海)有限公司;南通中博醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種檢測病源細(xì)胞的靶向性分子，結(jié)構(gòu)如下：

X-Y；

其中，X代表特異性靶向病源細(xì)胞的結(jié)合分子；

Y代表寡核苷酸探針；

“-”代表X和Y之間的共價(jià)連接、偶聯(lián)或偶合的關(guān)系。

2.如權(quán)利要求1所述的靶向性分子，其特征在于，X選自：特異性靶向病源細(xì)胞的抗體、配體、化學(xué)小分子或多肽。

3.如權(quán)利要求2所述的靶向性分子，其特征在于，所述的病源細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞，X是葉酸或葉酸-半胱氨酸偶聯(lián)物。

4.如權(quán)利要求3所述的靶向性分子，其特征在于，所述的腫瘤細(xì)胞是循環(huán)腫瘤細(xì)胞。

5.如權(quán)利要求1所述的靶向性分子，其特征在于，所述的寡核苷酸探針的序列中，磷酸鍵上存在硫代修飾。

6.一種制備靶向性分子的方法，所述靶向性分子結(jié)構(gòu)如下：

X-Y；

其中，X代表特異性靶向病源細(xì)胞的結(jié)合分子，該結(jié)合分子是葉酸-半胱氨酸偶聯(lián)物；

Y代表寡核苷酸探針；

“-”代表X和Y之間的共價(jià)連接、偶聯(lián)或偶合的關(guān)系；

所述方法包括：

(a)將寡核苷酸與琥珀酰亞胺-4-環(huán)己烷-1-碳酸酯溶液混合，將寡核苷酸上的氨基和琥珀酰亞胺-4-環(huán)己烷-1-碳酸酯以C-N共價(jià)鍵鍵合，獲得寡核苷酸-琥珀酰亞胺-4-環(huán)己烷-1-碳酸酯鍵合產(chǎn)物；

(b)在寡核苷酸-琥珀酰亞胺-4-環(huán)己烷-1-碳酸酯鍵合產(chǎn)物中加入葉酸-半胱氨酸偶聯(lián)物，將葉酸-半胱氨酸的硫基和琥珀酰亞胺-4-環(huán)己烷-1-碳酸酯上的馬來酰亞胺以C-S共價(jià)鍵鍵合；獲得寡核苷酸-葉酸-半胱氨酸產(chǎn)物。

7.權(quán)利要求1所述的靶向性分子的用途，用于制備檢測病源細(xì)胞的試劑或試劑盒。

8.一種檢測病源細(xì)胞的試劑盒，其中包括權(quán)利要求1所述的靶向性分子。

9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，其中還包括：特異性擴(kuò)增權(quán)利要求1所述的靶向性分子中寡核苷酸探針的引物；和/或

特異性針對權(quán)利要求1所述的靶向性分子中寡核苷酸探針的檢測探針，該檢測探針攜帶可檢測標(biāo)記。

10.一種檢測病源細(xì)胞的方法，包括：

(1)將權(quán)利要求1所述的靶向性分子與待測樣品共混，孵育；

(2)孵育結(jié)束后收集細(xì)胞，從細(xì)胞上洗脫權(quán)利要求1所述的靶向性分子；

(3)以步驟(2)洗脫的靶向性分子為模板，進(jìn)行PCR定量分析，根據(jù)定量分析結(jié)果獲知待測樣品中病源細(xì)胞的存在情況以及存在量。