[發明專利]一種犬傳染性氣管支氣管炎二聯活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201110311574.7
• 申請日: 2011-10-14
• 公開（公告）號: CN102343088A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 嵇康;張鵬超;孟超;沈元
• 申請（專利權）人: 浙江諾倍威生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/155;A61K39/02;A61P31/04;A61P31/14
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明涉及一種犬傳染性氣管支氣管炎二聯活疫苗及其制備方法，屬于獸用生物制品領域。

背景技術

犬傳染性氣管支氣管炎(或犬窩咳)是犬類流行最廣的上呼吸道疾病之一，它具有高傳染性和影響范圍廣等特點。目前此疾病在全球各個地區都有發現。學者目前普遍認為引起此疾病的主要病原體是犬副流感病毒和支氣管敗血波氏菌(Ettinger，Stephen?J.；Feldman，Edward?C.(1995).Textbook?of?Veterinary?Internal?Medicine(4^th?Edition).W.B.Saunders?Company)。由于此病病原體在狗群之間傳播的非常迅速，因此而得名“犬窩咳”。

犬副流感病毒(Canine?parainfluenza?virus，CPIV)屬于副粘液病毒亞科，副粘病毒屬。其具有三種特異性抗原：表面血球凝集抗原，表面神經胺酸酶抗原和內部核白衣抗原。當犬副流感病毒感染犬類后，病毒會破壞上呼吸道組織，引起干咳、尖咳、鼻塞等癥狀，嚴重者可引起支氣管肺炎。單獨病毒感染可造成6日的輕度臨床癥狀，但通常有其他細菌共同影響。

支氣管敗血波氏菌(Bordetella?bronchiseptica，)是革蘭氏陰性、需氧球桿菌。它是在患有氣管支氣管炎的狗中最常分離出的細菌。細菌潛伏期有2～14日，如不與其他病原體共同感染作用此細菌的臨床癥狀通常會持續10日。然而即使感染癥狀已消失，但此細菌可繼續在自然環境中生存6～14周，期間可再傳染至易感動物。此菌通過口鼻分泌物傳播，可通過直接或間接接觸感染。此菌感染的臨床癥狀包括黏液鼻塞、深咳、尖咳、干咳、不適，癥狀尤其在運動或情緒激動時會加重。若犬感染支氣管敗血波氏菌一般會引起其他病原體的感染。若感染第二病原體經常會引起嚴重肺炎。在狗場或庇護所或衛生欠缺飼養的狗具有更高被感染的幾率。有文獻報道稱此菌可經由狗傳染給其他種類動物，比如貓(Dwight?C.H.，Nigel?J.M.，Richard?L.W.et?al.(2004)Veterinary?Microbiology(2^nd?Edition).Blackwell?Publishing)。

犬窩咳在世界各地區均有病例發生記錄，傳播性非常強，危害嚴重，極易引發其他高致死性病原體感染。僅甘肅省2004年-2009年犬窩咳的調查中此病的整體發病率就高達是34.26％(盧旺銀，(2010)甘肅省犬窩咳的流行病學調查與防治。畜牧獸醫雜志；29(3))。在寵物動物大量集中的中大型城市這種病傳播的更為廣泛。

國內家庭飼養寵物的數量與日俱增，具不完全統計我國目前僅寵物犬的數量已超過1.5億只，在許多經濟發達城市的寵物數量與居民比例為1∶10。因此對寵物犬的健康要求越來越高。國外在預防和治療此犬窩咳早有大量研究，并已有多種有效預防產品，但是目前國內尚未有針對犬窩咳的疫苗，因此本發明填補了國內犬窩咳疫苗的空白。由于本發明選取的是國內分離弱化毒株，所以本發明對國內犬窩咳綜合病癥有著積極預防和高效控制的作用。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種為預防和控制犬副流感/支氣管敗血波氏菌引起的犬窩咳的傳播，可以有效預防該病的犬副流感/支氣管敗血波氏菌二聯疫苗及其生產方法。

具體實施方式

本發明主要通過以下技術方案實施：

一、生產用菌毒種的來源及特性

1.犬副流感病毒

(1)犬副流感病毒的分離

1)病毒由本發明人分離自大面積發生犬窩咳的肉狗養殖場中。將采集到的鼻腔拭子過濾除菌，接種生長至對數末期的Vero細胞上(購自Cambivac，Co.Ltd)。37℃靜置培養7天，凍融2次后，獲得含有病毒粒子的懸液。

2)吸取上述病毒懸液，提取DNA及RNA模板，經RT-PCR鑒定，該病毒懸液中含有犬副流感病毒。

按王鳳雪等人(王鳳雪，閏喜軍，柴秀麗，等.核酸水平檢測犬副流感病毒方法的建立.中國動物檢疫，2007，24(12)，24-25.)提供的副流感病毒PCR鑒定引物和方法進行擴增。

P1?5’-TACAATCCCACCTACAACAC-3’；P2?5’-GAATGATCCCTCCTCAAAGC-3’

擴增后產物為265bp測序結果與已報道的序列相符